Юу вэ. Тандем масс спектрометрийг (HPLC-MSMS) эмнэлзүйн оношлогоонд ашиглах. Материал ба арга

1

Шинэ 1,3,4-тиадиазолын амин хүчлийн LXT7-09 деривативыг тодорхойлж, тоон үзүүлэлтийг тодорхойлох баталгаажсан HPLC-MS/MS аргыг боловсруулсан. LHT7-09-ийн массын спектрометрийн илрүүлэлтийн хамгийн дээд мэдрэмжийг 5500 В-ийн цахилгаан шүрших хүчдэл ба 36 В-ийн бөөгнөрөл задлах потенциалтай эерэг ион илрүүлэх горимд олж авсан. Тодорхойлсон MRM шилжилтийг баталгаажуулсан. химийн бүтэц 1,3,4-тиадиазолын шинэ амин хүчлийн дериватив. Тиадиазолиламидын олон бүрэлдэхүүн хэсэгтэй хольцоос LCT7-09-ийг үр дүнтэй тусгаарлахын тулд янз бүрийн харьцаатай ацетонитрил ба ионгүйжүүлсэн усны хольцыг уусгагч болгон ашиглан өндөр үзүүлэлттэй шингэн хроматографийн градиент горимыг боловсруулсан. Эдгээр хроматографийн нөхцөлд LHT7-09 нэгдлийг хадгалах хугацааг 11 минут гэж тодорхойлсон. LHT7-09 нэгдлийн тоон хэмжээг тодорхойлохын тулд хроматографийн оргилын талбайг уусмалын концентрацаас хамааруулан тохируулгын уусмалыг боловсруулсан.

HPLC-ms/ms

хроматографи

масс спектрометр

тиадиазол

1. Казаишвили Ю.Г., Попов Н.С. Харханд формалинаар үүсгэгдсэн сарвууны хаван дахь тиадиазолын шинэ деривативуудын үрэвслийн эсрэг үйл ажиллагааны судалгаа / Ю.Г. Казаишвили, Н.С. Попов // Орчин үеийн асуудлуудшинжлэх ухаан, боловсрол. – 2013. – No3. www..

2. Мөөгөнцрийн эсрэг үйлчилгээтэй шинэ тиадиазолын деривативууд / A.S. Кошевенко [болон бусад] // Анагаах ухааны микологийн дэвшил. – 2015. – Т. 14. – С. 348-351.

3. Шинэ фурил-2-орлуулсан 1,3,4-тиадиазол, 1,2,4-триазолуудын нийлэгжилт ба хавдрын эсрэг үйл ажиллагаа / T.R. Ховсепян [болон бусад] // Хими-эмийн сэтгүүл. – 2011. – Т. 45. – No 12. – С. 3-7.

4. Попов Н.С., Демидова М.А. Тиадиазолын шинэ амин хүчлийн деривативын цочмог хордлогын үнэлгээ нь хулганад хэвлийн хөндийгөөр тарих / N.S. Попов, М.А. Демидова // Верхневолжский эмнэлгийн сэтгүүл. – 2016. – T. 15, дугаар. 1. – хуудас 9-12.

5. Попов Н.С., Демидова М.А. Харханд ходоодонд тарих үед тиадиазолын шинэ амин хүчлийн деривативын шархлаа үүсгэдэг байдлын үнэлгээ / N.S. Попов, М.А. Демидова // Докторант. – 2017. – No1(80). – 71-78-р тал.

6. 2-амин-5-алкил(арилалкил)-1,3,4-тиадиазолууд дээр суурилсан фенилтио- ба бензилсульфонил цууны хүчлийн амидуудын нийлэгжилт ба нянгийн эсрэг үйл ажиллагаа / С.А. Серков [болон бусад] // Хими-эмийн сэтгүүл. – 2014. – Т. 48, No 1. – С. 24-25.

7. Arpit K., Basavaraj M., Sarala P., Sujeet K., Satyaprakash K. Имидазотиадиазолын деривативын синтез ба фармакологийн идэвхжил // Acta Poloniae Pharmaceutica, Эмийн судалгаа. 2016. Боть. 73.Үгүй. 4. P. 937-947.

8. Eman M. Flefel, Wael A. El-Sayed, Ashraf M. Mohamed, New 1-thia-4-azaspirodecane-ийн синтез ба хорт хавдрын эсрэг үйл ажиллагаа, тэдгээрийн гаралтай тиазолопиримидин ба 1,3,4-тиадиазол тиогликозидууд // Молекулууд. 2017. Үгүй. 22(1). P. 170.

9. Хорхе Р.А. Диас, Жерардо Энрике Ками. Ацетазоламидын бүтцийн болон аналоги болох 5-амин-2-сульфонамид-1,3,4-тиадиазолын давс нь нүүрстөрөгчийн ангидразын дарангуйлах шинж чанар, шээс хөөх эм, таталтын эсрэг үйлчилгээтэй болохыг харуулж байна // Ферментийн дарангуйлал ба эмийн химийн сэтгүүл. 2016. Боть. 12. Үгүй. 6. P. 1102-1110.

10. Naiyuan Chen, Wengui D., Guishan L., Luzhi L. Dehydroabietic хүчилд суурилсан 1,3,4-тиадиазол-тиазолидиноны нэгдлүүдийн нийлэгжилт ба мөөгөнцрийн эсрэг үйл ажиллагаа // Молекулын олон янз байдал. 2016. Боть. 20. Үгүй. 4. P. 897-905.

11. Йомна, И.Эль-Газзар, Ханан Х.Жоржи, Шахенда М.Эль-Мессери. Шинэ (1,2,4-триазол эсвэл 1,3,4-тиадиазол)-метилтио дериватив хиназолин-4(3Н)-н DHFR дарангуйлагчийн синтез, биологийн үнэлгээ, молекулын загварчлалын судалгаа // Биорганик хими. 2017. Боть. 72. P. 282-292.

Масс спектрометрийн илрүүлэлт бүхий өндөр хүчин чадалтай шингэний хроматографи нь янз бүрийн биологийн объектуудад эмийг тодорхойлох, тоон тодорхойлох хамгийн ирээдүйтэй аргуудын нэг юм. Энэ арга нь өндөр өвөрмөц байдал, нарийвчлал, хамгийн бага концентрацитай бодисыг тодорхойлох чадвараараа тодорхойлогддог бөгөөд энэ нь эмнэлзүйн лабораторийн оношлогоонд чухал ач холбогдолтой фармакокинетик судалгаа, эмийн мониторингийн явцад эмийн тоон тодорхойлоход ашиглах боломжийг олгодог. Үүний тулд HPLC-MS/MS аргад суурилсан төрөл бүрийн эмийн бодис, түүний дотор шинэлэг бодисыг тоон тодорхойлох аргыг боловсруулж, баталгаажуулах шаардлагатай байна.

Стероид бус үрэвслийн эсрэг эмийн бүлгийн анхны эм нь 1,3,4-тиадиазол амид ба ацексамины хүчлийн шинэ дериватив болох ацесазоламид юм. Энэ нэгдлийн чухал давуу тал нь бага хоруу чанар, шархлаа үүсгэх чадвар багатай байдаг. Фармакокинетик судалгаа хийх, энэ эмийн био хүртээмжийг янз бүрийн аргаар хэрэглэхийн тулд биологийн шингэн дэх тоон хэмжээг тодорхойлох найдвартай аргыг боловсруулах шаардлагатай.

Энэхүү судалгааны зорилго HPLC-MS/MS ашиглан тиадиазолын деривативын бүлгээс стероид бус үрэвслийн эсрэг шинэ эмийг тодорхойлох, тоон тодорхойлох аргыг боловсруулах явдал байв.

Материал ба арга

Судалгааны объект нь "VNTs BAV" OJSC (Старая Купавна) -д проф. С.Я. Скачилова (Зураг 1).

2-(5-этил-1,3,4-тиадиазолил)амид 2-ацетиламиногексаны хүчил

Цагаан будаа. 1. LHT 7-09-ийн химийн бүтэц ( бүдүүлэг томъёо: C 12 H 20Н 4 О 2С; молийн масс 284,4 г/моль)

LHT 7-09 нэгдэл нь нунтаг юм цагаан, энэ нь усанд бараг уусдаггүй, спиртэнд уусдаг, ацетонитрилд амархан уусдаг.

Масс спектрометр илрүүлэх (HPLC-MS/MS) арга бүхий баталгаажсан өндөр хүчин чадалтай шингэн хроматографийг LCT 7-09-ийг тодорхойлж, тоон үзүүлэлтээр нь тодорхойлоход ашигласан.

Хроматографийг Agilent 1260 InfinityII өндөр хүчин чадалтай шингэн хроматограф (Agilent Technologies, Герман) ашиглан хийсэн. Судалгаанд Agilent Poroshell 120 EC-C18 2.7 μm 2.1 x 10 мм аналитик баганыг ашигласан. Судалгаанд хамрагдаж буй нэгдлийг тусгаарлахын тулд бид градиент хроматографийн горимыг боловсруулсан. Ацетонитрил, ионгүйжүүлсэн ус, аммонийн ацетатыг янз бүрийн харьцаагаар угаагч бодис болгон ашигласан.

Масс спектрометрийн хувьд ABSciexQTrap 3200 MD гурвалсан квадруполь масс спектрометрийг (ABSciex, Сингапур) цахилгаан шүрших ионы эх үүсвэртэй (TurboIonSpray мэдрэгчтэй TurboV) ашигласан. Масс спектрометрийг 6.1×10 -2 мг/л концентрацитай резерпиний туршилтын уусмалыг ашиглан тохируулсан.

Судалгаанд хамрагдсан дээжийн масс-спектрометрийн шинжилгээг хроматографаар нийлүүлсэн дээж, элюатыг шууд шахах замаар цахилгаан шүрших горимд хийсэн. Туршилтын дээжийг массын хроматограф руу шууд шахах ажлыг 4.61 мм диаметртэй тариурын насос ашиглан 10 мкл/мин хурдтайгаар гүйцэтгэсэн.

Тиадиазолын шинэ деривативыг тодорхойлох, хэмжих аргыг боловсруулахдаа шингэний өндөр үзүүлэлттэй хроматографи, масс илрүүлэх оновчтой нөхцлийг сонгосон. Хроматографийн баганаас бодис ялгарах хугацаа, MRM шилжилтийг харгалзан үзсэн (бүртгэлийг хийсэн). м/зЭхний аналитик квадруполь Q1 дээрх прекурсор ион ба м/зХоёр дахь аналитик квадруполь Q3 дээрх бүтээгдэхүүний ионууд). LCT 7-09-ийн хэмжээг тодорхойлохын тулд 0.397-397 нг/мл концентрацийн мужид тохируулгын графикийг байгуулсан.

AnalystMD 1.6.2.Software (ABSciex) программ хангамжийг ашигласан.

Үр дүн ба хэлэлцүүлэг

Туршилтын судалгааны эхний шатанд туршилтын дээжийг тариурын насос ашиглан масс детекторт шууд оруулах замаар масс илрүүлэх ажлыг гүйцэтгэсэн. Дээж бэлтгэх шатанд LHT 7-09 (500 нг/мл) уусмалыг аммонийн ацетат (0.1%) нэмэн 2:1 харьцаатай ацетонитрил ба ионжуулсан усны холимогт бэлтгэсэн.

Урьдчилсан туршилтууд эерэг ионуудыг бүртгэх горимд LHT 7-09-ийг тодорхойлох мэдрэмж өндөр, массын спектр нь сөрөг ионуудыг бүртгэх горимоос илүү эрчимтэй, мэдээлэл сайтай байсныг харуулсан. Үүнтэй холбогдуулан цаашдын судалгаанд зөвхөн эерэг иончлолын горимыг ашигласан.

Хүчтэй оргилд хүрэхийн тулд масс илрүүлэх дараах нөхцлийг сонгосон. : эерэг туйлшрал, цахилгаан шүрших хүчдэл 5500.0 В, бөөгнөрөх боломж ба тарилгын потенциал - 36.0 ба 6.5 В, хөшигний хийн даралт 20.0 psi, атомчлах хийн даралт 40.0 psi, хурд 10 мкл/мин. Сканнердах хүрээ нь 270-300 Да байв.

Эхний аналитик квадруполь Q1-ийн олж авсан массын спектрийн дүн шинжилгээ нь эдгээр нөхцөлд устөрөгчийн протон нэмснээр судлагдсан нэгдлийн протонжуулсан молекул + үүсэж байгааг харуулсан. м/ z 285.2 Тийм (Зураг 2).

Цагаан будаа. 2. LHT 7-09 протонжуулсан молекулын массын спектр (эерэг ион + скан хийх горимд)

Хоёрдахь аналитик дөрвөлсөн туйлт Q3 дээр урьдчилсан ионы хувьд бүтээгдэхүүний ионуудыг утгатайгаар тэмдэглэв. м/з 285.2 Тийм ээ. 2-р дарааллын массын спектрийн шинжилгээ нь олон оргил байгааг харуулсан бөгөөд тэдгээрийн 3 нь хамгийн хүчтэй байв. м/з 114.2 Да, м/з 130.2 Да ба м/з 75.1 Да (Зураг 3).

Цагаан будаа. 3. Бүтээгдэхүүний ионуудын массын спектр (эерэг ион сканнердах горимд, прекурсор ионм/ z285.2 Тийм)

Өндөр эрчимтэй ионы дохиог авахын тулд Q2 мөргөлдөөний үүрний энергийн оновчтой утгыг сонгосон (0-ээс 400 В хүртэлх энергийн хүрээг авч үзсэн). Утгатай бүтээгдэхүүний ионуудын хувьд м/ z 114.2 Да, 130.2 Да, 75.1 Да нь мөргөлдөх үүрний оновчтой энерги нь 27 В; 23 В ба 49 В.

үнэ цэнэ бүхий бүтээгдэхүүн ион гэж үздэг м/ z 114.2 Да нь 5-амин-2-этил-1,3,4-тиадиазолын фрагмент бөгөөд бусад 1,3,4-тиадиазолын деривативуудыг задлахад мөн ижил утгатай бүтээгдэхүүний ион илэрдэг. м/ z. Утгатай бүтээгдэхүүн ион м/ z 130.2 Да нь ацексамины хүчлийн протонжуулсан хэсэг байх магадлалтай. Ийнхүү судалж буй дээжийн масс илрүүлэх үр дүн нь 1,3,4-тиадиазолын шинэ деривативын химийн бүтцийг баталгаажуулсан.

Туршилтын судалгааны дараагийн шатанд туршилтын нэгдлийг HPLC-масс спектрометрээр шинжлэв.

HPLC-MS/MS горимд дараах иончлолын нөхцлийг ашигласан: цахилгаан шүрших хүчдэл 5500.0 В, хөдөлгөөнт фазын урсгалын хурд 400 мкл/мин, азотын температур 400 °C, хөшигний хий ба шүрших урсгалын даралт 20.0 ба 50.0 psi тус тус. Нэг массын спектрийн бичлэгийн хурд секундэд 100 спектр байв. Массын спектрийг нэгтгэн авахын тулд хроматограмм дээр 10.5-11.5 минутын хугацааг сонгосон; Бүтээгдэхүүний ионуудын дохионы эрчмийг үндэслэн судалж буй нэгдэлд тохирох ионы гүйдлийн цаг хугацааны хамаарлын муруй ба бие даасан дохионы оргил талбайг байгуулав. Аналитик баганад оруулсан дээжийн хэмжээ 10 мкл байв.

Судалгаанд хамрагдаж буй нэгдлүүдийг тусгаарлахын тулд өндөр хүчин чадалтай шингэн хроматографийн градиент горимыг ашигласан бөгөөд энэ нь аналитик баганын үүдэнд шингээгчийн найрлагыг өөрчилснөөр баталгаажсан. Ацетонитрил, ионгүйжүүлсэн ус, аммонийн ацетатыг янз бүрийн харьцаагаар угаагч бодис болгон ашигласан. Градиент хроматографийн горимыг сонгосон нь изократ шүүрлийн горимын нөхцөлд (өөр өөр концентрацитай ацетонитрил ашиглах үед) хадгалах хугацаатай тэгш хэмтэй хэлбэрийн туршилтын бодисын оргилыг олж авах боломжгүй байсантай холбоотой юм. шинжилгээ хийхэд тохиромжтой. Судалгаанаас үзэхэд хамгийн оновчтой уусмалын нийлүүлэлтийн горим нь: 0-ээс 4 минутын хооронд ацетонитрилийн концентраци 1%; 4-8 минутын хооронд ацетонитрилийн концентраци 99% хүртэл шугаман өсөлт; 8-аас 12 минут хүртэл - изократик хэсэг (1% ацетонитрил). Судалгааны ажил дууссаны дараа хроматографийн баганыг 30% -ийн ацетонитрилийн уусмалаар 5 минутын турш угаана.

Тайлбарласан хроматографийн горимыг ашиглах үед судлагдсан нэгдлийн хувьд хангалттай эрчимтэй тэгш хэмтэй оргилыг олж авсан (Зураг 4).

Цагаан будаа. 4. Хроматограмм LHT 7-09 (аналитик баганаЧадварлагPoroshell 120 EC-C18 2.7 мкм 2.1×10 мм; градиент хроматографийн горим)

Өөр өөр концентрацитай LCT 7-09 уусмалын олж авсан хроматограммын шинжилгээ нь эдгээр шүүрлийн нөхцөлд хадгалах хугацаа (tR) 11 минут байсан бөгөөд судалж буй бодисын концентрацаас хамааралгүй болохыг харуулсан. Үүнтэй холбогдуулан хадгалах хугацааны утгыг олон бүрэлдэхүүн хэсэгтэй хольц дахь LHT 7-09-ийн жинхэнэ эсэхийг баталгаажуулах нэмэлт шалгуур болгон ашиглаж болно. Эдгээр хроматографийн параметрүүдийг LHT 7-09-ийг зөвхөн масс детектор ашиглан бус, фотометр зэрэг бусад детекторуудыг тодорхойлоход ашиглаж болох нь анхаарал татаж байна.

Тиадиазолын шинэ деривативын хэмжээг тодорхойлохын тулд 0.397 нг/мл-ээс 397 нг/мл хүртэлх концентрацийн мужид тохируулгын графикийг байгуулсан (Зураг 5).

Цагаан будаа. 5. LCT 7-09-ийн концентрацийг тодорхойлох шалгалт тохируулгын график (абсцисса тэнхлэгийн дагуу LCT 7-09-ийн концентраци нг/мл, ордны тэнхлэгийн дагуу импульсийн оргил хэсэг)

Шалгалт тохируулгын уусмалыг боловсруулахын тулд LHT 7-09-ийн уусмалыг 0.397 концентрацид ашигласан; 1.980; 3.970; 19.8; 39.7; 198.0; 397.0 нг/мл. Оргил талбайн судлагдсан нэгдлийн концентрацаас хамаарах хамаарлыг дараах регрессийн тэгшитгэлээр тайлбарлав.

y= 8.9e 5 ·x 0.499, регрессийн коэффициентийн утга r=0.9936.

Боловсруулсан шалгалт тохируулгын шийдэл нь өргөн хүрээний концентрацид судлагдсан нэгдлүүдийг өндөр нарийвчлалтай тоон тодорхойлох боломжийг олгодог бөгөөд энэ нь ашиглах боломжтой болгодог гэдгийг тэмдэглэх нь зүйтэй. энэ аргаэмийн бодисын чанарыг үнэлэх, фармакокинетикийн судалгаа хийх.

Ийнхүү судалгааны үр дүн нь HPLC-MS/MS ашиглан тиадиазолын шинэ амин хүчлийн деривативыг тодорхойлох, тоон тодорхойлох аргыг боловсруулсан явдал юм.

Дүгнэлт

1. HPLC-MS/MS нь тиадиазолын шинэ амин хүчлийн деривативыг өндөр нарийвчлалтайгаар тодорхойлох, хэмжих боломжийг олгодог.
2. Тиадиазолын шинэ дериватив LHT 7-09-ийн массыг илрүүлэх нь эерэг ионы сканнердах горимд (MRM шилжилт - прекурсор ион Q1) явагдах ёстой. м/ z 285.2 Тийм; бүтээгдэхүүний ионууд Q3 м/ z 114.2 Да, м/ z 130.2 Да ба м/ z 75.1 Да).
3. LCT 7-09-ийг олон бүрэлдэхүүн хэсэгтэй хольцоос тусгаарлахын тулд өндөр хүчин чадалтай шингэн хроматографийн техникийг боловсруулсан (аналитик багана Agilent Poroshell 120 EC-C18 2.7 мкм 2.1 × 10 мм; уусгагч ацетонитрил: ионгүйжүүлсэн ус: аммонийн ацетат; градиент горим).

Ном зүйн холбоос

Попов Н.С., Малыгин А.С., Демидова М.А. Тиадиазолын шинэ деривативыг таних, тоон тодорхойлох HPLC-MS/MS АРГА ХЭМЖЭЭ // Шинжлэх ухаан, боловсролын орчин үеийн асуудлууд. – 2017. – No5.;
URL: http://science-education.ru/ru/article/view?id=26988 (хандалтын огноо: 02/01/2020). "Байгалийн Шинжлэх Ухааны Академи" хэвлэлийн газраас эрхлэн гаргадаг сэтгүүлүүдийг та бүхэнд хүргэж байна.

Түлхүүр үгс

СТЕРОИД / LIPIDS / ЦУСНЫ ИЛДВЭР / Бодисын солилцооны профайл / ҮЙЛДВЭРИЙН ХАЯГДАЛ/ СТЕРОИД / ЛИПИД / ЦУСНЫ ИЙЛДВЭР / Бодисын солилцооны танилцуулга / ҮЙЛДВЭРИЙН ХАЯГДАЛ

Тэмдэглэл мал эмнэлгийн шинжлэх ухааны шинжлэх ухааны нийтлэл, шинжлэх ухааны бүтээлийн зохиогч - Чаховский Павел Анатольевич, Янцевич Алексей Викторович, Дмитроченко Алеся Егоровна, Иванчик Александр Викторович

Нөлөөлөл антропоген хүчин зүйлүүдхүн амьтны биед олон талт нөлөө үзүүлдэг. Тэдний цогц нөлөөллөөс шалтгаалан хувь хүний ​​хүчин зүйлийн сөрөг нөлөөг тодорхойлох нь нэлээд хэцүү байдаг. хэцүү даалгавар. Эдгээр хүндрэлийг даван туулах боломжийг олгодог метаболомик аргачлалыг калийн бордооны үйлдвэрлэлийн хаягдлаар хамрын доторх шахах явцад туршилтын амьтдын липидийн профайлд үзүүлэх нөлөөллийн шинж чанар, цар хүрээг үнэлэхэд ашигласан. хэрэглээ ундны ус, калийн үйлдвэрлэлийн боломжит үйл ажиллагааны бүсэд байрлах эх үүсвэрээс олж авсан. Сийвэнгээс липидийг салгах ажлыг хатуу фазын олборлолт дээр суурилсан тусгайлан боловсруулсан техник ашиглан хийсэн бөгөөд энэ нь дээжээс холестеролыг арилгах боломжтой болгодог. Дээж бүрийг масс спектрометрийн илрүүлэлт (HPLC-MS) бүхий өндөр хүчин чадалтай шингэний хроматографаар шинжилсний дараа үүссэн хроматограммыг үндсэн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн шинжилгээ (PCA) болон кластерийн шинжилгээг ашиглан боловсруулав. Боловсруулсан техник нь цусны ийлдэс дэх гидрофобик метаболитыг үр дүнтэй салгах боломжийг олгодог. Туршилтын амьтдын цусны ийлдэс дэх липидийн профиль, ялангуяа фосфолипид ба оксистероидын агууламжийг тогтоож, бодисын солилцооны үйл явцын ялгааг туршилтын болон хяналтын амьтдын хооронд илрүүлсэн. Туршилтын амьтдын цусны ийлдэс дэх оксистероидын концентраци хяналтын бүлэгтэй харьцуулахад нэмэгдсэн байна.

Холбогдох сэдвүүд мал эмнэлгийн шинжлэх ухааны шинжлэх ухааны бүтээлүүд, шинжлэх ухааны бүтээлийн зохиогч нь Чаховский Павел Анатольевич, Янцевич Алексей Викторович, Дмитроченко Алеся Егоровна, Иванчик Александр Викторович нар юм.

• Аж үйлдвэрийн давтамжийн далайцаар зохицуулагдсан соронзон орны нөлөөнд хархны элэгний гепатоцитын органеллуудын хариу үйлдэл

  2014 он / Белкин Анатолий Дмитриевич, Мичурина Светлана Викторовна

• Түүхий маханд дааврын эмийг бөөнөөр нь сонгон тодорхойлох. ß-агонистын шинжилгээ

  2016 / Куликовский А.В., Кузнецова О.А., Иванкин А.Н.

• Усны организм дахь убикиноныг тодорхойлох өндөр үзүүлэлттэй шингэн хроматографийн хэрэглээ

  2003 / Рыбин В.Г.

• Хархны шээсэнд агуулагдах N7-этил]-гуаниныг хүхрийн гичийн нөлөөллийн шинж тэмдэг болгон тодорхойлох

  2017 / Ольга Игоревна Орлова, Георгий Васильевич Каракашев, Владимир Игоревич Шмурак, Виктория Владимировна Абзианидзе, Елена Игоревна Савельева

• Эерэг цэнэглэгдсэн ионуудыг бүртгэх горимд урсодеоксихолийн хүчлийг шинжлэх HPLC-MS аргыг боловсруулах.

  2013 / Краснов Илья Александрович, Бобков Д.Е., Зайцева М., Присяч С.С., Краснов Н.В.

• Халдварт болон үрэвсэлт өвчнийг хурдан оношлох зорилгоор тромдефензин дээр суурилсан шинэ үеийн туршилтын системийг бий болгох технологийг хөгжүүлэх.

  2015 / Иванов Юрий Борисович, Васильченко Алексей Сергеевич

• Карбамазепин ба карбамазепин-10,11-эпоксидыг HPLC-MS/ms-ээр нэгэн зэрэг тодорхойлох арга

  2015 / Родина Т.А., Мельников Е.С., Соколов А.В., Прокофьев А.Б., Архипов В.В., Адамов Г.В., Поздняков Д.Л., Олефир Ю.В.

• Өөх тосны хүчил, ургамлын тосны стероидын найрлага

  2006 / Хасанов В.В., Рыжова Г.Л., Дычко К.А., Куряева Т.Т.

• Хроматографи-масс спектрометр ашиглан биологийн материал дахь гидазепамыг тодорхойлох аргыг боловсруулах, баталгаажуулах

  2015 / A.V. Чубенко, М.А. Савченко

• Эмчилгээний эмийг хянах зорилгоор цусны ийлдэс дэх циклоспорины агууламжийг тодорхойлох

  2008 / Федорова Г.А., Подольская Е.П., Новиков А.В., Лютвинский Я., Краснов Н.В.

БАЙГАЛЬ ОРЧНЫ БОХИРДОЛТОЙ БАЙДАЛЫН ДАХЬ БОДИСЫН БОЛОВСРОЛЫН ӨӨРЧЛӨЛТИЙГ ЭРХТЭН ИЛРҮҮЛЭХ зорилгоор Гвинейн гахайн ийлдсийн ЛИПИДИЙН ШИНЖИЛГЭЭ.

Антропоген хүчин зүйлийн нөлөөлөл нь хүн, амьтны биед олон талт нөлөө үзүүлдэг. Тэдний нарийн төвөгтэй нөлөөллөөс шалтгаалан зарим хүчин зүйлийн сөрөг нөлөөг илрүүлэх нь нэлээд төвөгтэй ажил юм. Эдгээр хүндрэлийг даван туулах боломжийг олгодог метаболомийн аргачлалыг калийн бордооны үйлдвэрлэлийн хаягдал, эх үүсвэрээс ундны усны хэрэглээнд хамрын дотор тарьсны дараа туршилтын малын липидийн төлөв байдалд үзүүлэх нөлөөллийн шинж чанар, зэргийг үнэлэхэд ашигласан болно. калийн бордоо үйлдвэрлэх боломжит үйл ажиллагааны бүсэд байрладаг. Сийвэн дэх липидийг тусгаарлах ажлыг хийсэн -тайдээжээс холестриныг зайлуулах боломжийг олгодог дээжийг хатуу фазын олборлолтод суурилсан тусгайлан боловсруулсан техникийн тусламж. Дээж бүрийг HPLC-MS шинжилгээнд хамруулсны дараа олж авсан хроматограммыг үндсэн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн шинжилгээ ба кластерийн шинжилгээний аргыг ашиглан эмчилсэн. Боловсруулсан техник нь цусны ийлдэс дэх гидрофобик метаболитыг үр дүнтэй салгах боломжийг олгодог. Туршилтын амьтдын сийвэнгийн липидийн профайл, ялангуяа фосфолипид ба оксистероидын агууламж тогтоогдсон бөгөөд туршилтын болон хяналтын амьтдын бодисын солилцооны үйл явцад ялгаатай байдал илэрсэн. Туршилтын амьтдын ийлдэс дэх гидроксистероидын концентраци нь хяналтын бүлэгтэй харьцуулахад нэмэгдэж байгааг харуулж байна.

Шинжлэх ухааны ажлын текст "Хүрээлэн буй орчны бохирдуулагчид өртөх үед бодисын солилцооны анхны өөрчлөлтийг тодорхойлохын тулд далайн гахайн цусны ийлдэс дэх липидийн профайлыг шинжлэх HPLC-MS арга" сэдвээр

[гиена ба ариун цэврийн байгууламж 3/2014

Чаховский П.А.1, Янцевич А.В.2, Дмитроченко А.Е.2, Иванчик А.В.2.

ИЛДВЭРИЙН ЛИПИДИЙН ПРОФИЛИЙН ШИНЖИЛГЭЭНИЙ HPLC-MS-ТЕХНИК

Гвинейн гахайг бохирдуулагч бодист өртөх үед бодисын солилцооны өөрчлөлтийг эрт илрүүлэх орчин

TU "Бүгд найрамдах улсын эрүүл ахуйн шинжлэх ухаан, практикийн төв", 220012, Минск, Беларусь; ^ Институт биоорганик хими Үндэсний академиБеларусийн шинжлэх ухаан, 220141, Минск, Бүгд Найрамдах Беларусь

Антропоген хүчин зүйлийн нөлөөлөл нь хүн, амьтны биед олон талт нөлөө үзүүлдэг. Тэдний цогц нөлөөллөөс шалтгаалан хувь хүний ​​хүчин зүйлийн сөрөг нөлөөллийг тодорхойлох нь нэлээд хэцүү ажил юм. Эдгээр хүндрэлийг даван туулах боломжийг олгодог метаболомик аргачлалыг калийн бордоо үйлдвэрлэх, хэрэглээний хог хаягдлаар хамрын хөндийд шахах үед туршилтын амьтдын липидийн профайлд калийн бордоо үйлдвэрлэх хаягдлын нөлөөллийн шинж чанар, түвшинг үнэлэхэд ашигласан. калийн үйлдвэрлэлийн боломжит үйл ажиллагааны бүсэд байрлах эх үүсвэрээс авсан ундны усны . Сийвэнгээс липидийг салгах ажлыг хатуу фазын олборлолт дээр суурилсан тусгайлан боловсруулсан техник ашиглан хийсэн бөгөөд энэ нь дээжээс холестеролыг арилгах боломжтой болгодог. Дээж бүрийг масс спектрометрийн илрүүлэлт (HPLC-MS) бүхий өндөр хүчин чадалтай шингэний хроматографаар шинжилсний дараа үүссэн хроматограммыг үндсэн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн шинжилгээ (PCA) болон кластерийн шинжилгээг ашиглан боловсруулав. Боловсруулсан техник нь цусны ийлдэс дэх гидрофобик метаболитыг үр дүнтэй салгах боломжийг олгодог. Туршилтын амьтдын цусны ийлдэс дэх липидийн профиль, ялангуяа фосфолипид ба оксистероидын агууламжийг тогтоож, бодисын солилцооны үйл явцын ялгааг туршилтын болон хяналтын амьтдын хооронд илрүүлсэн. Туршилтын амьтдын цусны ийлдэс дэх оксистероидын концентраци хяналтын бүлэгтэй харьцуулахад нэмэгдсэн байна.

Түлхүүр үгс: стероидууд; липидүүд; цусны ийлдэс; бодисын солилцооны профайл; үйлдвэрийн хаягдал.

П.А.Чаховский1, А.В.Янцевич2, А.Е.Дмитроченко2, А.В.Иванчик2 - Гвинейн гахайн ийлдсийн ЛИПИДИЙН ПРОФИЛИЙН ШИНЖИЛГЭЭНИЙ ШИНЖИЛГЭЭНИЙ ҮЙЛЧИЛГЭЭНИЙ ХОЧРОЛТОЙ ХӨДӨЛГӨӨН ДАХЬ МЕТАБОЛИЗМИЙН ӨӨРЧЛӨЛТИЙГ ЭРҮҮТ ИЛРҮҮЛЭХ.

1 Бүгд Найрамдах Эрүүл ахуйн шинжлэх ухаан, практикийн төв, Минск, Бүгд Найрамдах Беларусь, 220012; 2Биорганик химийн хүрээлэн, Минск, Беларусь, 220141

захидал харилцааны хувьд: Чаховский Павел Анатольевич, chahovsky@gmail. com

Антропоген хүчин зүйлийн нөлөөлөл нь хүн, амьтны биед олон талт нөлөө үзүүлдэг. Тэдний нарийн төвөгтэй нөлөөллөөс шалтгаалан зарим хүчин зүйлийн сөрөг нөлөөг илрүүлэх нь нэлээд төвөгтэй ажил юм. Эдгээр хүндрэлийг даван туулах боломжийг олгодог метаболомийн аргачлалыг калийн бордооны үйлдвэрлэлийн хаягдал, эх үүсвэрээс ундны усны хэрэглээнд хамрын дотор тарьсны дараа туршилтын малын липидийн төлөв байдалд үзүүлэх нөлөөллийн шинж чанар, зэргийг үнэлэхэд ашигласан болно. калийн бордоо үйлдвэрлэх боломжит үйл ажиллагааны бүсэд байрладаг. Сийвэнгээс липидийг тусгаарлах нь дээжээс холестериныг зайлуулах боломжийг олгодог дээжийг хатуу фазын олборлолтод суурилсан тусгайлан боловсруулсан техникийн тусламжтайгаар гүйцэтгэсэн. Дээж бүрийг HPLC -MS шинжилгээнд хамруулсны дараа олж авсан хроматограммыг үндсэн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн шинжилгээ, кластерийн шинжилгээний аргыг ашиглан эмчилсэн. Боловсруулсан техник нь цусны ийлдэс дэх гидрофобик метаболитыг үр дүнтэй салгах боломжийг олгодог. Туршилтын амьтдын сийвэнгийн липидийн профайл, ялангуяа фосфолипид ба оксистероидын агууламж тогтоогдсон бөгөөд туршилтын болон хяналтын амьтдын бодисын солилцооны үйл явцад ялгаатай байдал илэрсэн. Туршилтын амьтдын ийлдэс дэх гидроксистероидын концентраци нь хяналтын бүлэгтэй харьцуулахад нэмэгдэж байгааг харуулж байна.

Түлхүүр үгс: стероидууд, липидүүд, цусны ийлдэс, бодисын солилцооны шинж чанар, үйлдвэрлэлийн хаягдал.

Танилцуулга

Нэг хамгийн чухал ажлуудсистемийн биологи ба функциональ генетик - протеомик, транскриптомийн өгөгдөл, бие махбодид тохиолддог бодисын солилцооны үйл явцын талаархи мэдээллийг нэгтгэх. Бие махбодид тохиолддог аливаа өвчин, эмгэг процесс нь эд, цусан дахь бага молекул жинтэй метаболитуудын агууламжаар илэрдэг. Цусны сийвэн дэх бага молекул жинтэй метаболитуудын салшгүй шинж чанаруудын хувьд 1971 онд "бодисын солилцоо" гэсэн нэр томъёог нэвтрүүлсэн. Олон ангиллын метаболитыг нэгэн зэрэг шинжлэх нь туйлын хэцүү бөгөөд боломжгүй байдаг тул бодисын солилцооны профайлыг судлахад цөмийн соронзон резонансын (NMR) спектроскопи зэрэг хэд хэдэн аргыг ихэвчлэн ашигладаг. өндөр нарийвчлалтайба хроматографи-масс спектрометр.

Дүрмээр бол метаболомикийн судалгаа хийхдээ дээж бэлтгэх явцад бусад бүрэлдэхүүн хэсгүүдээс тусгаарлагдсан тодорхой бүлгийн бодисоор хязгаарлагддаг. Үүссэн бүлгийн өгөгдлийг тайлбарлахад хялбар байдаг.

Бодисын солилцооны профайл (ялангуяа шээс, цусны сийвэн) нь хорт нэгдлүүдийг хэрэглэснээс үүссэн физиологийн өөрчлөлтийн мөн чанарыг тодорхойлоход ашиглаж болно. Ихэнх тохиолдолд ажиглагдсан өөрчлөлтүүд нь элэг, өөхний эд зэрэг өвөрмөц гэмтлийн нэмэлт шинж чанарыг өгдөг.

Цусны ийлдэс дэх стероид ба липидийн шинжилгээ нь оношлогооны асар их чадвартай. Цусны сийвэнгийн липидийн найрлага, стероид гормонууд, тэдгээрийн урьдал бодисууд, тэдгээрийн бодисын солилцооны бүтээгдэхүүнүүд нь биеийн олон функциональ параметрүүдийг тодорхойлдог. Эдгээр бодисууд нь бодисын солилцоо, зүрх судасны үйл ажиллагааг зохицуулахад чухал зохицуулах үүрэг гүйцэтгэдэг бөгөөд цочмог болон архаг стрессийн үед бие махбодийн хариу үйл ажиллагаанд оролцдог.

Стероидын профайл нь нийлэгжилт, бодисын солилцоо алдагдахтай холбоотой олон тооны эмэгтэйчүүдийн болон онкологийн өвчний оношлогооны өвөрмөц шалгуур юм. стероид гормонууд, заримыг нь зөвхөн стероидын профайлаар оношлох боломжтой. Профайлын шинжилгээнд үнэмлэхүй утгыг энгийн хувьсагч болгон ашиглах, тэдгээрийг нормтой харьцуулах боломж маш чухал юм. Гэсэн хэдий ч тоо хэмжээний харьцааг өөрчлөх нь илүү чухал байж болох юм. Нэмж дурдахад, стероидын профайл нь олон тооны стероидын талаархи мэдээллийг нэгэн зэрэг өгдөг.

Сийвэнгийн стероидын профайлыг тодорхойлох - үр дүнтэй аргастероид бодисын солилцооны бараг бүх эмгэгийг тодорхойлох нь оношлох боломжийг олгодог

Төрөлхийн бөөрний дээд булчирхайн гиперплази, I хэлбэрийн гипералдостеронизм, анхдагч гиперальдостеронизм, Иценко-Кушингийн өвчин, бөөрний дээд булчирхайн дутагдал гэх мэт эмнэлзүйн олон нөхцөл байдалд үнэн зөв оношлох. Стероидын профиль нь бэлгийн ялгарал, бэлгийн булчирхайн үйл ажиллагааны эмгэгийг оношлоход чухал ач холбогдолтой. түүнчлэн гипоталамусын гипофиз-бөөрний булчирхайн дутагдал.

Калийн бордооны хаягдлын зонхилох бүрэлдэхүүн хэсэг болох давсыг илүүдэл жинтэй туршилтын хархны биед хэт их хэрэглэх нь альдостероны синтезийг хэт идэвхжүүлж, цусны даралт ихсэх, бодисын солилцооны синдромтой бөөрний гэмтэл үүсгэдэг.

Бүс нутгуудад аж үйлдвэрийн үйлдвэрлэл-тай өндөр зэрэгтэйбайгаль орчны бохирдол, хүн амын өвчлөл харьцангуй "цэвэр" бүс нутгуудаас ихэвчлэн өндөр байдаг. Бидний судалгааны объект нь калийн хүдэр их хэмжээгээр олборлож, боловсруулдаг бүсэд оршдог Солигорск хот байв. Калийн ургамлын давсны овоолго, лаг хадгалах байгууламжийн бүсэд 100 м-ээс дээш гүнд гүний усыг бүрхсэн хлорид-натрийн давсжилтын бүс үүссэн бөгөөд энэ нь ундны усны эх үүсвэр, агаар мандлын бохирдолд нөлөөлж болзошгүй юм. .

Калийн бордооны үйлдвэрлэлийн бүс нутагт хүрээлэн буй орчны бие даасан бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн бохирдлын нөлөөллийг үнэлэхийн тулд бид цусны ийлдэс дэх липидийн профайлыг химийн бодисын хольцын нөлөөн дор эрт үеийн бодисын солилцооны эмгэгийн үзүүлэлт болгон шинжлэв.

Ажлын зорилго нь калийн бордооны үйлдвэрлэлийн хаягдал, үйлдвэрлэлийн хаягдалд өртөж болзошгүй эх үүсвэрээс ундны усны хэрэглээнд өртсөн лабораторийн амьтдын бодисын солилцооны өөрчлөлтийг масс спектрометрийн илрүүлэх өндөр үзүүлэлттэй шингэн хроматографийн аргыг ашиглан тодорхойлоход оршино. (HPLC-MS).

Судалгааны объект нь туршилтын болон хяналтын бүлгийн туршилтын амьтдын цусны ийлдэс байв.

Материал ба арга

Туршилтын судалгаа 305-347 гр жинтэй 35 далайн гахай (17 эм, 18 эр) дээр явуулсан.

[гиена ба ариун цэврийн байгууламж 3/2014

Туршилтын бүлэг (үйлдвэрлэлийн үйлдвэрлэлийн хаягдлаар калийн бордоо болон ундны усСолигорскийн усан хангамжийн системээс), 20 хүн (10 эмэгтэй, 10 эрэгтэй);

Хяналтын бүлэг (приминг хийх процедурын улмаас үүссэн стрессийн хүчин зүйлийн нөлөөллийг оруулахгүйн тулд натрийн хлоридын изотоник уусмалаар түрхэх), 15 хүн (8 эрэгтэй, 7 эмэгтэй).

Туршилтын явцад амьтдын ерөнхий байдал, хоол хүнс, усны хэрэглээг өдөр бүр хянаж байв.

Калийн бордооны үйлдвэрлэлийн хог хаягдлыг амьсгалын замын архаг хэлбэрээр (12 долоо хоног) загварчлахын тулд бид MU № 11-11-10-2002 "Уургийн эрүүл ахуйн зохицуулалтын хор судлалын болон харшлын судалгааг зохион байгуулахад тавигдах шаардлага. Ажлын талбайн агаарт аэрозол агуулсан бодисууд, үүнд праймерын тунг тодорхойлох. Давсны овоолгын дээжийг гантиг зуурмагт нэг төрлийн тоостой болтол нунтаглаж, нэрмэл усанд шаардлагатай концентраци хүртэл уусгаж, туршилтын амьтдын биеийн жинг харгалзан үзсэн (тунг тохируулахын тулд биеийн жинг долоо хоног бүр хянаж байсан). Тооцоолсон тун нь: туршилтын эхэнд - 2,028 мг/0,1 см3, 4 долоо хоногийн дараа - 2,85 мг/0,1 см3, 6 долоо хоногийн дараа - 3,17 мг/0,1 см3, 8 долоо хоногийн дараа, туршилт дуусах хүртэл 3,8 мг/0,1 байна. см3.

Мэдээ алдуулахгүй далайн гахайг хэвтээ байрлалд толгойгоо өндийлгөж, найтаахаас сэргийлж пипеткээр (2-3 минутаас дээш) бүлээн уусмалыг хамрын нүхэнд ээлжлэн (бутархай) тарьсан. . Үүний үр дүнд "хагарах" чимээ нь уусмал амьсгалын замд нэвтэрч байгааг баталгаажуулав.

Туршилтын бүлэг амьтдын хольцыг 12 долоо хоногийн турш долоо хоногт 5 өдөр өдөрт нэг удаа "амьсгалав". Хяналтын бүлгийн амьтад давсны уусмал (0.9% NaCl) "амьсгалав".

Биологийн материалыг цуглуулахын тулд амьтдад мэдээ алдуулалт (эфирийн мэдээ алдуулалт) хийж, толгойг нь салгасны дараа цус цуглуулсан. Сийвэнг 3000 rpm-т 15 минутын турш центрифуг хийх замаар авч, цаашдын судалгаанд зориулж -20 хэмд хадгална. Цусны сийвэн дэх фосфолипид, оксистероид, өөх тосны хүчлийг шинжилнэ.

Дээж бэлтгэх. 10-5 М (1 мл дээж тутамд 10 мкл) концентрацитай байхын тулд цусны ийлдэс дэх дотоод стандарт прогестероныг нэмсэн. Дараа нь дээжинд агуулагдах уурагуудыг тунадасжуулах, стероидуудыг гаргаж авахын тулд метанолыг эцсийн концентраци 70% (1 мл дээжинд 2.33 мл метанол) нэмээд дараа нь 15 минутын турш 10,000 г-т центрифуг хийсэн. Дээжинд агуулагдах уургууд нь өтгөн тунадас үүсгэсэн. Супернатантыг тунадасаас салгаж, 100 мг октадесилсилилийн цахиурлаг гель агуулсан урьдчилан болзолт хатуу фазын ханд (SPE) баганаар дамжуулав. SPE баганыг 2 мл метанол, 2 мл ус, 2 мл 70%-ийн метанолыг дараалан дамжуулж нөхцөл болгосон. Эхний шатанд цусны сийвэн болон бусад биологийн шингэнд агуулагдах холестерин, түүнчлэн бусад өндөр гидрофобик липидүүд нь баганад холбогддог. Холестеролыг холбосны дараа баганыг 2 мл 70% метанолоор дахин угаана. Хэрэв дээжинд холестерин ихтэй эсвэл их хэмжээний дээж байгаа бол хэрэглэнэ

Бид өндөр сорбент агуулсан SPE баганыг ашигласан. Элюатуудыг нэгтгэж, ууршуулсан. Ууршуулах ажиллагааг 50°С температурт инертийн хийн урсгалаар хийсэн. Хуурай үлдэгдлийг 500 мкл метанолд уусгаж, 10,000 граммаар 10 минутын турш центрифуг хийв. Энэ тохиолдолд метанолд уусдаггүй туйлын нэгдлүүд тунадасждаг. Хэмжээг хурдасгаас салгаж, метанолын концентраци 10% хүртэл усаар шингэлнэ. Үүссэн уусмалыг урьдчилан бэлтгэсэн SPE баганаар (2 мл метанол, 2 мл ус, 2 мл 10% метанол) дамжуулж, 2 мл 10% метанолоор угаана. Баганад холбогдсон стероидуудыг 3 мл 80% метанолоор цэвэрлэв. Уусмалыг ууршуулж, хуурай үлдэгдлийг 100 мкл метанолд уусгана. Үүссэн уусмалыг HPLC-MS ашиглан шинжлэв.

HPLC шинжилгээ. Шинжилгээг LCQ-Fleet масс спектрометрийн детектороор тоноглогдсон Accela хроматограф дээр хийсэн. Тусгаарлах ажлыг 4.6*150 мм геометрийн параметр бүхий Cosmosil 5C18-MS-II багана (Nacalai Tesque, Япон) дээр хийсэн.

Салах хөтөлбөр (уусгагч А - ус, уусгагч В - метанол, урсгалын хурд 500 мкл/мин): 5 минутын турш 60% B, 12 минут - шугаман градиент 60-95% B, 10 минут - 95% B, 8 минут - шугаман градиент 95-100% B, 5 мин - 100% B, 5 мин - 60% B.

Масс спектрометрийн шинжилгээнд атмосферийн даралтын химийн иончлолын (APCI) эх үүсвэрийг ашигласан. Ионжуулалтын эх үүсвэрийн параметрүүд: ууршуулагчийн температур - 350°C, хатаах хийн урсгал - 35 нэгж, туслах хийн урсгал - 5 нэгж, хялгасан судасны температур - 275°C, хялгасан судасны хүчдэл - 18 В, ионы линзний хүчдэл - 80 В. Ашигласан Data Dependent™ сканнер 50-1000 м/ц сканнердах мужид ион баригч ашиглан горим.

Химийн иончлолын горимд (нийт ионы гүйдэл) масс спектрометрийн детектор ашиглан олж авсан хроматограммуудыг Xcalibur багцын (Thermo Sci, АНУ) Qual Browser програмыг ашиглан текст формат руу хөрвүүлсэн. Хүлээн авсан мэдээллийг Statistica 10 багцад хэрэгжсэн үндсэн бүрэлдэхүүн хэсгийн арга, кластерийн шинжилгээ, дендрограмм бүтээх хэрэгслүүдийг ашиглан боловсруулсан. Лавлах номыг массын спектрийг тайлбарлаж, бие даасан нэгдлүүдийг тодорхойлоход ашигласан.

Үр дүн ба хэлэлцүүлэг

Дасан зохицох анхны арга нь Macherey-Nagel-ийн хатуу фазын олборлолтын гарын авлагад тодорхойлсон ийлдэс болон цусны сийвэнгээс стероидуудыг хатуу фазын аргаар гаргаж авах арга байв. Хатуу фазын олборлох баганыг ашиглах зөвлөмжийг агуулсан хэрэглээний гарын авлага. Хатуу фазын олборлолтоор тохируулсан дээж бэлтгэх арга нь далайн гахайн цусны ийлдэсээс фосфолипид, оксистероид, өөх тосны хүчлийг үр дүнтэй тусгаарлах боломжийг олгосон.

Тайлбарласан хроматографийн аргаар ялгах арга нь ийлдэс дэх стероид даавар болон липидийн аль алиныг үр дүнтэй ялгах боломжийг олгодог.

Дээжийг тайлбарласан аргуудын дагуу шинжлэв. Зураг дээр. 1 (хавтасны 2-р хуудсыг үзнэ үү) жишээ болгон туршилтын бүлгийн 3 дээжийн шинжилгээнээс олж авсан давхардсан хроматограммуудыг харуулав (тодруулсан)

Цагаан будаа. 4. 21.5 минут хадгалах хугацаатай бодисын массын спектр: a - сөрөг горимд атмосферийн даралт дахь химийн ионжуулалт; b - эерэг горимд атмосферийн даралт дахь химийн ионжуулалт.

улаан өнгөтэй) болон хяналтын бүлгийн 3 дээж (цэнхэр). Үүнтэй төстэй дүр зураг бусад тохиолдолд ажиглагдсан.

Эдгээр өгөгдлийн багцыг боловсруулахын тулд бид үндсэн бүрэлдэхүүн хэсгийн арга (PCA) болон кластерийн шинжилгээг ашигласан бөгөөд энэ нь хяналтын болон туршилтын бүлгийн хоорондох липидийн профайлын ялгааг тодорхойлох боломжийг олгосон. 1 ба 2-р үндсэн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн PCA графикийг олж авсан

өгөгдлийн хэмжээсийг багасгах үед Зураг дээр үзүүлэв. 2 (2-р нүүр хуудсыг үзнэ үү). Графикаас харахад цэгүүдийг 2 бүлэгт нэгтгэж, 1, 4, 2, 3-р квадратуудад тус тус байрлуулсан болохыг анзаарахад хялбар байдаг. Энэ тохиолдолд прототипүүдэд тохирох цэгүүд нь 1 ба 4-р квадратуудад давамгайлж, хяналтын дээжид тохирох цэгүүдийг 2, 3-р квадратуудад байрлуулна. байрлуулах замаар олж авсан дендрограмм

[гиена ба ариун цэврийн байгууламж 3/2014

Хроматограммд байгаа оргилуудыг тодорхойлох

Хадгалах хугацаа, мин “+” горим дахь үндсэн оргилууд “-” горимд

19,15 393,7 446,8

448,7 493,5 623,4 524,4

19,35 87 227 271 335,5 353,3 371,2 389.1 448.2 493.3 405,4

21,50 316,1 390,0

430.3 448.4 779,1

23,8 319.4 391,6 429.5 783,2

24,35 414,8 448,8

31,73 313,3 330,9

33,9 231.5 245.5 263,3 281,1 295.1 305.2 371.3 521.0 663.1 279,4

Бодис

Фосфатидилхолин

Арахидийн хүчил

Фосфатидын хүчил 42:4

Арахид ба докосат-траеной хүчил

Докосапентаеноид

Линолын хүчил

Дигидроксихолестерол

өвчүүний шинжилгээг Зураг дээр үзүүлэв. 3. Тиймээс хроматографийн өгөгдлийн статистик дүн шинжилгээ нь хяналтын болон туршилтын бүлэгт хамаарах туршилтын амьтдын организмд тохиолддог бодисын солилцооны үйл явцын ялгааг харуулж байна.

Бодисын солилцооны тодорхой өөрчлөлтийг тодорхойлохын тулд массын спектрийг тайлж, тодорхойлсон.

тусдаа холболтыг зааж өгсөн (хүснэгтийг үз). Дээжний эзэлхүүн шинжилгээнд хангалтгүй байсан бөгөөд ийлдэс дэх стероид гормоны профайлын өөрчлөлтийг илрүүлэх боломжийг бидэнд олгосонгүй. Гэсэн хэдий ч хроматограммд завсрын туйлшрал бүхий липидүүд илэрсэн.

Янз бүрийн иончлолын горимд бүртгэгдсэн бодисын массын спектрийг шинжлэх замаар бие даасан нэгдлүүдийг тодорхойлсон. Ийнхүү 21.5 минутын хадгалах хугацаатай хоёр иончлолын горимд байгаа бодисын массын спектрийг Зураг дээр үзүүлэв. 4. Энэ спектрийн шинжилгээгээр уг бодис нь 780 (R1(311) = 20:0 тосны хүчил (арахидийн хүчил), R2(331) = 22:4 тосны хүчил (докосатетраеной) молекул жинтэй диацил-сн-глицерофосфат болохыг харуулсан. хүчил)).

42.52 минутын хадгалалтын хугацаатай хроматографийн оргил нь цөсний хүчлийн биосинтезийн урьдал бодисуудын нэг болох дигидроксихолестеролтой тохирч байгааг тогтоожээ. Цусны ийлдэс дэх оксистероидын агууламжийн ялгаа нь цөсний хүчлийн бодисын солилцооны эмгэгийг илтгэнэ. Зураг дээр үзүүлсэн хроматограммд байгааг тэмдэглэж болно. 1, туршилтын амьтдын цусны ийлдэс дэх оксистероидын концентраци нь хяналттай харьцуулахад нэмэгдсэн (35-45 минутын хадгалалтын хугацаатай оргил үе).

дүгнэлт. Ажилд ашигласан техник нь хүрээлэн буй орчны бохирдуулагчид өндөр үр ашигтай нөлөө үзүүлэх үед липидийн солилцооны эмгэгийг эрт илрүүлэх боломжийг олгодог. Хүлээн авсан үр дүн нь хамрын хөндийн хэрэглээг харуулж байна усан уусмалТуршилтын амьтдын давсны овоолго Cavia porcellus нь липид ба оксистероидын солилцооны өөрчлөлтөд хүргэдэг. Ялангуяа амьтдад цөсний хүчлийн урьдал бодис (оксистероид) нэмэгдэж байгаа нь элэг, цөсний хүчлийн биосинтезд оролцдог ферментийн үйл ажиллагааны алдагдалтай холбоотой байж болно. Тиймээс, тайлбарласан аргыг техноген бохирдолтой бүс нутгийн оршин суугчдын липидийн солилцооны эмгэгийг тодорхойлоход ашиглаж болно.

Уран зохиол

1. Horning E.C., Horning M.G. Бодисын солилцооны профайл: метаболитыг шинжлэх хийн фазын аргууд. Клин. Хими. 1971; 17(8): 802-9.

2. Constantinou M.A., Tsantili-Kakoulidou A., Andreadou I., Iliodro-mitis E.K., Kremastinos D.T., Mikros E. Миокардийн ишеми-реперфузи, ишемийн урьдчилсан нөхцөл, антиоксидант интервенцийг судлахад NMR-д суурилсан метабономикийн хэрэглээ. евро. Ж.Фарм. Шинжлэх ухаан. 2007; 30(3-4): 303-14.

3. Лу В., Беннетт Б.Д., Рабиновиц Ж.Д. LC-MS дээр суурилсан зорилтот метаболомикийн аналитик стратеги. Ж.Хроматогр. Б.Аналит. Технологи. Биомед. Амьдралын шинжлэх ухаан. 2008; 871(2): 236-42.

4. Novotny M.V., Soini H.A., Mechref Y. Хроматограф, электрофорез, масс-спектр-метрийн профайлд тусгагдсан биохимийн бие даасан байдал. Ж.Хроматогр. Б.Аналит. Технологи. Биомед. Амьдралын шинжлэх ухаан. 2008; 866(1-2): 26-47.

5. Германы Ж.Б., Гиллис Л.А., Смиловиц Ж.Т., Зивкович А.М., Уоткинс С.М. Метаболомик дахь липидомик ба липидийн профиль. Карр. Санал. Липидол. 2007; 18(1): 66-71.

6. Schwarz E., Liu A., Randall H., Haslip C., Keune F., Murray M. et al. Төрөлхийн бөөрний дээд булчирхайн гиперплазийн нярайн скринингийн хоёр дахь түвшний тест болгон UPLC-MS/MS-ээр стероидын профайлыг ашиглах: Ютагийн туршлага. Хүүхдийн эмч. Res. 2009; 66(2): 230-5.

7. Rauh M. LC-MS/MS бүхий стероидын хэмжилт. Өргөдөл

Урлагт. Чаховский нар.

Цагаан будаа. 3. Дээжийг бүлэгт нэгтгэхийг харуулсан кластерийн шинжилгээнд үндэслэн хийсэн дендрограмм.

Урлагт. Чаховский нар.

Цагаан будаа. 1. Хяналтын бүлгийн 1-3 (улаан өнгөөр ​​тодруулсан), туршилтын бүлгийн 15-17 (цэнхэрээр тодруулсан) дээжийн хосолсон хроматограмм.

Факторын хавтгай дээрх тохиолдлын проекц (1 x 2) Косинусын квадратын нийлбэр >= 0.00 тохиолдлууд

18/3 9/з 21/1 ■ О

1 зээл "Ш о 28/1" 22/10 41/1 х

1-р хүчин зүйл: 65.71%

Цагаан будаа. 2. Хроматограммыг PCA ашиглан боловсруулснаар олж авсан график. Хяналтын бүлгийг цэнхэр өнгөөр, туршилтын бүлгийг улаан өнгөөр ​​тодруулсан.

Өндөр хүчин чадалтай шингэний хроматографи (HPLC) нь хөдөлгөөнгүй фаз (сорбент) -ээр дүүрсэн хроматографийн баганаар дамждаг шингэнийг хөдөлгөөнт фаз (MP) гэж үздэг баганын хроматографийн арга юм. HPLC баганууд нь баганын оролтын өндөр гидравлик даралтаар тодорхойлогддог тул HPLC-ийг заримдаа "өндөр даралтын шингэний хроматографи" гэж нэрлэдэг.

Бодисыг ялгах механизмаас хамааран HPLC-ийн дараахь хувилбаруудыг ялгадаг: шингээх, хуваах, ион солилцох, хэмжээг хасах, хирал гэх мэт.

Адсорбцийн хроматографийн хувьд бодисыг салгах нь боловсруулсан гадаргуутай шингээгчийн гадаргуугаас, жишээлбэл, цахиурлаг гелийг шингээх, шингээх чадвараас шалтгаалан үүсдэг.

HPLC хуваалтын үед салалт нь суурин фаз (ихэвчлэн суурин зөөгчийн гадаргуу дээр химийн аргаар залгагдсан) ба хөдөлгөөнт фазын хооронд тусгаарлагдсан бодисын тархалтын коэффициентүүдийн зөрүүгээс шалтгаалан үүсдэг.

Туйлшралаас хамааран PF ба NP HPLC нь хэвийн фазын болон урвуу фазын гэж хуваагддаг.

Хэвийн үе шат нь туйлын сорбент (жишээлбэл, NH 2 эсвэл CN бүлгүүдтэй цахиурлаг гель эсвэл силикагель) ба туйлт бус PF (жишээлбэл, янз бүрийн нэмэлтүүдтэй гексан) ашигладаг хроматографийн хувилбар юм. Хроматографийн урвуу фазын хувилбарт химийн хувьд туйлшралгүй өөрчлөгдсөн сорбент (жишээлбэл, туйлт бус алкил радикал C 18) ба туйл хөдөлгөөнт фаз (жишээлбэл, метанол, ацетонитрил) ашигладаг.

Ион солилцооны хроматографийн хувьд уусмал дахь катион ба анион болгон задарсан бодисын хольцын молекулууд нь сорбентын ионы бүлгүүдтэй харилцан адилгүй солилцооны хурдтай байдаг тул сорбентоор (катион солилцогч эсвэл анион солилцуур) шилжих үед тусгаарлагддаг.

Хэмжээг хасах (шигшүүр, гель нэвчүүлэх, гель шүүх) хроматографийн хувьд бодисын молекулууд нь суурин фазын нүх сүвийг нэвчих чадвараараа ялгаатай байдаг тул хэмжээгээр нь ялгадаг. Энэ тохиолдолд суурин фазын хамгийн бага тооны нүхэнд нэвтрэх чадвартай хамгийн том молекулууд (хамгийн их молекул жинтэй) баганыг хамгийн түрүүнд орхиж, жижиг молекулын хэмжээтэй бодисууд хамгийн сүүлд гардаг.

Ихэнхдээ салалт нь нэгээр биш, хэд хэдэн механизмаар нэгэн зэрэг явагддаг.

HPLC аргыг хийн бус аливаа аналитын чанарыг хянахад ашиглаж болно. Шинжилгээ хийхийн тулд зохих багаж хэрэгслийг ашигладаг - шингэн хроматограф.

Шингэн хроматограф нь ихэвчлэн дараах үндсэн бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг агуулдаг.

– ХӨБ бэлтгэх хэсэг, үүнд хөдөлгөөнт фаз бүхий сав (эсвэл хөдөлгөөнт үе шатанд орсон бие даасан уусгагчтай сав) болон ХФ-ийн хий тайлах систем;

- шахах систем;

– хөдөлгөөнт фазын холигч (шаардлагатай бол);

– дээжийг нэвтрүүлэх систем (инжектор);

– хроматографийн багана (термостатад суулгаж болно);

- илрүүлэгч;

– мэдээлэл цуглуулах, боловсруулах систем.

Ус шахах систем

Шахуургууд нь өгөгдсөн баганыг PF нийлүүлдэг тогтмол хурд. Хөдөлгөөнт фазын найрлага нь шинжилгээний явцад тогтмол эсвэл өөр өөр байж болно. Эхний тохиолдолд процессыг изократик гэж нэрлэдэг бөгөөд хоёр дахь нь градиент юм. Хөдөлгөөнт фазыг шүүхээр шахах системийн өмнө 0.45 μм нүхний диаметртэй шүүлтүүрийг заримдаа суурилуулдаг. Орчин үеийн шингэн хроматографын шахуургын систем нь нэг буюу хэд хэдэн компьютерийн удирдлагатай насосуудаас бүрдэнэ. Энэ нь градиент элюцийн үед тодорхой хөтөлбөрийн дагуу PF-ийн найрлагыг өөрчлөх боломжийг танд олгоно. Холигч дахь PF бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг холих нь нам даралтын үед (шахуургын өмнө) болон өндөр даралттай (насосуудын дараа) хоёуланд нь тохиолдож болно. Холигчийг PF бэлтгэхэд ашиглаж болох ба изократик шүүрлийн үед ашиглаж болох боловч изократик процессын хувьд PF бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг урьдчилан холих замаар бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн илүү нарийвчлалтай харьцааг олж авдаг. Аналитик HPLC-ийн насосууд нь баганын оролтод 50 МПа хүртэлх даралттай үед 0.1-10 мл / мин хооронд багана руу PF-ийн тогтмол урсгалын хурдыг хадгалах боломжийг олгодог. Гэхдээ энэ утга нь 20 МПа-аас хэтрэхгүй байхыг зөвлөж байна. Шахуургын дизайнд багтсан тусгай сааруулагч системээр даралтын импульсийг багасгадаг. Шахуургын ажлын хэсгүүд нь зэврэлтэнд тэсвэртэй материалаар хийгдсэн бөгөөд энэ нь PF найрлага дахь түрэмгий бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг ашиглах боломжийг олгодог.

Эмнэлзүйн лабораториудад өндөр хүчин чадалтай шингэн хроматографийг тандем масс спектрометрийн (HPLC-MS/MS) ашиглах нь сүүлийн 10-12 жилийн хугацаанд асар их нэмэгдсэн гэж Clinical Biochemist Reviews сэтгүүлд нийтэлсэн байна. Зохиогчид HPLC-MS/MS шинжилгээний өвөрмөц чанар нь бага молекул жинтэй молекулын шинжилгээ хийх дархлаа судлалын аргууд болон сонгодог өндөр үзүүлэлттэй шингэний хроматографиас (HPLC) хамаагүй давуу бөгөөд хийн хроматографи-масс спектрометрээс (GC) хамаагүй өндөр дамжуулалттай болохыг тэмдэглэжээ. -MS). Энэ аргын ердийн эмнэлзүйн шинжилгээнд түгээмэл болсон нь одоогоор аргын өвөрмөц чадвараар тайлбарлагддаг.

HPLC-MS/MS аргын гол давуу талууд нь:
• Жижиг молекулын тоон шинжилгээг үнэн зөв хийх боломж;
• Олон тооны зорилтот нэгдлүүдийн нэгэн зэрэг дүн шинжилгээ хийх;
• Өвөрмөц онцлог;
• Шинжилгээний өндөр хурд.

IN сүүлийн жилүүдэдШинжилгээ хийх цаг, үр дүнд нь лабораторийн бүтээмжийг нэмэгдүүлэхэд ихээхэн анхаарал хандуулдаг. HPLC/MS/MS-ийн богино аналитик баганыг ашигласнаар шинжилгээний хугацааг эрс багасгахын зэрэгцээ шинжилгээний онцлогийг эрс нэмэгдүүлдэг. Агаар мандлын даралтын иончлол (API), тандем гурвалсан квадруполь масс спектрометр ба дэвшилтэт өндөр хүчин чадалтай шингэний хроматограф, түүнчлэн холбогдох дээж бэлтгэх аргууд нь HPLC-MS/MS-ийг орчин үеийн технологийн тэргүүн эгнээнд авчирсан. аналитик аргуудэмнэлзүйн судалгаанд зориулагдсан.

Эмнэлзүйн анагаах ухаанд HPLC/MS/MS-ийн хэрэглээний үндсэн чиглэлүүд:
• Стероид (стероид хавтан), пурин, пиримидин болон бусад нэгдлүүдийн бодисын солилцооны бүрэн дүр төрхийг олж авах;
  шинэ төрсөн хүүхдэд бодисын солилцооны төрөлхийн алдааг илрүүлэх шинжилгээ (нэг шинжилгээнд хэдэн арван өвчнийг илрүүлэх);
• Эмчилгээний хяналт эм- дархлал дарангуйлагч, периоконвульсантууд, ретровирусын эсрэг эм, антикоагулянтууд болон бусад эмүүд - үйлдвэрлэгчийн иж бүрдэл байгаа эсэхээс үл хамааран. Бодис бүрт үнэтэй иж бүрдэл худалдаж авах шаардлагагүй - та өөрийн аргыг боловсруулж болно;
• Эмнэлзүйн хор судлал - 500 гаруй мансууруулах бодисын нэгдэл, тэдгээрийн метаболитыг нэг шинжилгээгээр баталгаажуулах шинжилгээгүйгээр хийх.
  протеомик ба метаболомик.

Нэмж дурдахад HPLC-MSMS нь шээсний олигосахарид, сульфатид, урт гинжин өөхний хүчил, урт гинжин цөсний хүчил, метилмалоны хүчил, порфирийн судалгаа, пурин, пиримидины солилцооны эмгэг бүхий өвчтөнүүдийг илрүүлэхэд ашиглагддаг.

Шингэн хроматографийн хэрэглээний жишээ
эмнэлзүйн шинжилгээнд тандем масс спектрометртэй хослуулан.

Нярайн скрининг: HPLC-MS/MS-ийг эмнэлзүйн оношлогоонд өргөнөөр ашигласны анхны жишээ бол нярайн бодисын солилцооны төрөлхийн алдааг илрүүлэх шинжилгээ юм. Одоогоор орж байна хөгжингүй орнуудЭнэ нь ердийн арга бөгөөд ацедеми, аминоацидопати, өөх тосны хүчлийн исэлдэлтийн гажиг зэрэг 30 гаруй өвчнийг хамардаг. Хэрэв цаг алдалгүй арилгахгүй бол ноцтой асуудалд хүргэдэг төрөлхийн гажигтай холбоотой судалгааг онцгой анхаарах хэрэгтэй (жишээлбэл, зүрх, элэг томрох, тархины хаван). Нярайн скрининг хийхэд HPLC-MS/MS ашиглахын давуу тал нь бүх амин хүчлүүд болон ацилкарнитиныг нэгэн зэрэг хурдан, хямд, өндөр өвөрмөц байдлаар шинжлэх чадвар юм.

Эмчилгээний эмийн хяналт:Шилжүүлэн суулгасны дараа эрхтэн татгалзахаас сэргийлэх дархлаа дарангуйлагч сиролимус (рапамицин) эмийг боловсруулж нэвтрүүлсэн нь HPLC-MS/MS-ийг эмнэлзүйн лабораторид нэвтрүүлэх гол хөшүүрэг болсон. Орчин үеийн арга HPLC-MS/MS нь такролимус, сиролимус, циклоспорин, эверолимус, микофеной хүчлийг нэгэн зэрэг тодорхойлох боломжийг олгодог.

HPLC-MS/MS нь мөн цитотоксик, ретровирусын эсрэг эм, трициклик антидепрессант, таталтын эсрэг эм болон хувь хүний ​​тунг шаарддаг бусад эмийн шинжилгээнд ашиглагддаг.

HPLC-MSMS арга нь 0.1-500 нг/мл концентрацийн мужид варфарины R- ба S-энантиомеруудыг салгаж, тоо хэмжээг тодорхойлох боломжийг олгодог.

Мансууруулах бодис, өвдөлт намдаах эм: HPLC-MS/MS нь дээж бэлтгэхэд хялбар, шинжилгээний хугацаа богино байдаг тул эдгээр нэгдлүүдийн шинжилгээнд өргөн хэрэглэгддэг. Энэ аргыг одоогоор эмнэлзүйн лабораториудад өргөн хүрээний байгаа эсэхийг илрүүлэхэд ашиглаж байна мансууруулах бодис. Аргын өвөрмөц онцлог, мэдрэмж нь дээжийг хамгийн бага бэлтгэлтэйгээр нэг дээжинд янз бүрийн ангиллын 500 гаруй нэгдлүүдийг нэгэн зэрэг шинжлэх боломжийг олгодог. Тиймээс шээсний шинжилгээний хувьд дээжийг 50-100 дахин шингэлэх нь хангалттай. Үсийг шинжлэхэд 100-200 ширхэг үсний оронд нэг үс нь хар тамхины хэрэглээний баримтыг найдвартай тогтооход хангалттай.

Эндокринологи ба стероидын шинжилгээ: HPLC-MS/MS нь тестостерон, кортизол, альдестерон, прогестерон, эстриол болон бусад олон төрлийн стероидын шинжилгээнд олон дотоод шүүрлийн лабораторид өргөн хэрэглэгддэг.

Цусан дахь витамин D3, D2-ийн түвшинг тодорхойлохын тулд HPLC-MS/MS-ийг ашиглах лабораториуд нэмэгдэж байна.

I. Стероидыг тодорхойлох (стероид профайл).

Эмнэлэг, клиникийн лабораториуд HPLC/MS/MS ашиглан олон стероидыг нэгэн зэрэг тодорхойлох боломжтой болсон. Энэ тохиолдолд том хэмжээний дээж авах шаардлагагүй бөгөөд энэ нь хүүхдийн дээжийг шинжлэхэд онцгой ач холбогдолтой юм.

Хэд хэдэн (профайл) стероидуудыг тодорхойлохыг зөвлөж буй тохиолдлууд:
• Төрөлхийн бөөрний дээд булчирхайн гиперплази (CAH) нь стероидын биосинтезийн төрөлхийн гажиг юм. Энэ бол бөөрний дээд булчирхайн бор гадаргын ферментийн зохисгүй үйл ажиллагаанаас үүдэлтэй удамшлын бүлэг өвчин бөгөөд энэ нь кортизолын үйлдвэрлэл буурахад хүргэдэг. NAS-ийг найдвартай оношлохын тулд кортизол, андростендион, 17-гидроксипрогестероныг хэмжихийг зөвлөж байна. HPLC/MS/MS нь 100% итгэлтэйгээр нэг шинжилгээгээр бүх гурван стероидын хэмжээг үнэн зөв тодорхойлох боломжийг олгодог.
• Дархлалын шинжилгээг ашиглан нярайн ердийн скрининг нь өөр өөр байдаг өндөр түвшинурт эерэг ба худал сөрөг үр дүн. Зөвхөн кортизол төдийгүй альдостерон ба 11-дезоксикортизолыг HPLC/MS/MS-ээр тодорхойлох нь бөөрний дээд булчирхайн дутагдлыг анхдагч, хоёрдогчоос ялгах боломжийг олгодог.
• HPLC/MS/MS нь түрүү булчирхайн үрэвсэл, аарцагны архаг өвдөлтийн хам шинжийн үед стероидыг тодорхойлох боломжийг олгодог.
• HPLC-MS/MS нь стероидын профайлыг тодорхойлж, бага насны хүүхдүүдэд бөөрний дээд булчирхайн бор гадаргын хавсарсан бэлгийн бойжилтын шалтгааныг тодорхойлох боломжтой. Эдгээр хүүхдүүдэд тестостерон, андростендион, дегидроэпиандростерон (DHEA) болон түүний сульфатын агууламж өндөр настай хүүхдүүдийнхээс арай өндөр байсан нь тогтоогджээ.
• Идэвхтэй тамхичид, идэвхгүй тамхичид, тамхи татдаггүй хүмүүсийн ийлдэст 15 стероид даавар, бамбай булчирхайн даавар байгаа эсэхийг шинжилж, өвчтөний утааны хордлого болон дааврын концентраци хоорондын хамаарлыг судлах болно.
• HPLC/MS/MS нь шээс дэх зарим эмэгтэй стероид дааврын профайлыг тодорхойлоход хэрэглэгддэг.
• HPLC/MS/MS-ийг чихрийн шижингийн мэдрэлийн эмгэгээс урьдчилан сэргийлэх мэдрэлийн идэвхт дааврын концентрацийг үнэлэхэд ашигласан.

II. Бамбай булчирхайн дааврын хэмжээг тодорхойлох

Бамбай булчирхайн дааврыг тодорхойлох ердийн аргууд нь ихэвчлэн радиоиммун шинжилгээнд тулгуурладаг бөгөөд энэ нь өндөр өртөгтэй бөгөөд зөвхөн T3 ба T4-ийг илрүүлдэг бөгөөд энэ нь бамбай булчирхайн үйл ажиллагааг тодорхойлох, бүрэн зохицуулах чадварыг хязгаарлаж болзошгүй юм.

• Одоогийн байдлаар HPLC-MSMS ашиглан ийлдэс дэх бамбай булчирхайн таван дааврын шинжилгээг нэгэн зэрэг хийж байна, үүнд тироксин (T4), 3,3′,5-трийодтиронин (T3), 3,3′,5′- (rT3) орно. , 3 ,3'-diiodothyronine (3,3'-T2) ба 3,5-diiodothyronine (3,5-T2) 1 -500 нг/мл концентрацийн мужид.
• HPLC/MS/MS аргыг мөн бамбай булчирхайн хагалгаа хийлгэсэн өвчтөнүүдийн дааврын найрлагад дүн шинжилгээ хийхэд ашигладаг. Хагалгааны дараа тироксин (T4), триодотиронин (T3), чөлөөт T4, бамбай булчирхайг өдөөдөг даавар (TSH) -ийн концентрацийн түвшинг тодорхойлно. HPLC/MS/MS нь TSH болон бамбай булчирхайн дааврын концентраци хоорондын хамаарлыг тогтоох маш сайн арга болох нь тогтоогдсон.
• Хүний шүлс болон ийлдэс дэх тироксин (T4)-ийг тодорхойлоход HPLC/MS/MS аргыг ашигласан. Энэ арга нь өндөр давтагдах чадвар, нарийвчлал, илрүүлэх хязгаар нь 25 pg / мл-ээр тодорхойлогддог. Судалгаанаас үзэхэд эутиреоид өвчтөнүүд болон Грейвсийн өвчтэй өвчтөнүүдийн шүлсний T4 концентраци нь оношлогооны хамаарал байгааг харуулж байна.

HPLC/MS/MS арга нь биологийн шингэн дэх бүх стероидуудыг найдвартай тодорхойлоход шаардлагатай мэдрэмж, өвөрмөц чанар, нарийвчлалтай болсон тул оношилгооны чадварыг, ялангуяа стероидын багцыг тодорхойлоход сайжруулдаг.

III. HPLC/MS/MS-ээр 25-гидроксивитамин D-ийг тодорхойлох

25-гидрокси витамин D (25OD) нь Д аминдэмийн эргэлтийн гол хэлбэр бөгөөд түүний идэвхтэй хэлбэрийн урьдал хэлбэр юм. (1,25-дигидроксивитамин D). Хагас задралын хугацаа урт байдаг тул 25OD-ийг тодорхойлох нь өвчтөний бие дэх Д аминдэмийн төлөв байдлыг тодорхойлоход чухал ач холбогдолтой. Витамин D нь хоёр хэлбэрээр байдаг: витамин D3 (холекальциферол) ба витамин D2 (ergocalciferol). Энэ хоёр хэлбэр нь тус тусын 25OD хэлбэрт метаболизмд ордог. Маш их үнэ цэнэОношлогооны хувьд витамины хоёр хэлбэрийг өндөр нарийвчлалтай тодорхойлж, Д аминдэмийн дутагдалтай өвчтөнүүдийг хянах боломжтой аналитик аргууд байдаг бөгөөд өнөөг хүртэл ашигласан аргууд нь D2 ба D3 витаминыг тусад нь тодорхойлох боломжийг олгодоггүй. Үүнээс гадна D2 витамины өндөр концентрацитай үед D3-ийн илрэх хэмжээг дутуу үнэлдэг. Өөр нэг сул тал бол цацраг идэвхт изотопыг ашиглах явдал юм. HPLC/MS/MS аргыг хэрэглэснээр цацраг идэвхт изотопыг ашиглахаас зайлсхийх төдийгүй витамины идэвхтэй хэлбэрийг тусад нь тодорхойлох боломжтой болсон.

Энэ аргыг дараахь өвчтөнүүдэд хэрэглэнэ.
1. Хэрэв та биед Д витамин бага байгааг сэжиглэж байгаа бол;
2. Хэрэв тодорхойгүй хордлого гэж сэжиглэж байгаа бол;
3. Д аминдэмийн түвшин бага байгаа эмчилгээ хийлгэж буй өвчтөнүүдийг шалгаж үзэхэд;
4. HPLC/MS/MS-ийн хэрэглээ нь өвчтөнүүдийг хянахдаа хоёр хэлбэрийг тусад нь тодорхойлох боломжийг олгосон.

IV. Дархлаа дарангуйлагчийг HPLC/MS/MS-ээр тодорхойлох

Эрхтэн шилжүүлэн суулгасны дараа татгалзахгүйн тулд дархлаа дарангуйлах эмийг насан туршдаа уух ёстой. Эмчилгээний маш нарийн хүрээтэй, өндөр хоруу чанар бүхий дархлаа дарангуйлагч нь хамгийн их үр дүнд хүрэхийн тулд хувь хүний ​​тунг шаарддаг. Тиймээс дархлаа дарангуйлах гол эмүүд: циклоспорин А, такролимус, сиролимус, эверолимус зэргийг хянах нь цусан дахь эмийн концентрациас хамааран өвчтөн бүрийн эмийн тунг тохируулахад чухал ач холбогдолтой юм.

Эдгээр эмийг хянахын тулд дархлааны шинжилгээг ашигладаг хэвээр байгаа боловч эдгээр аргууд нь өндөр өртөгтэй бөгөөд өвөрмөц чанар, нарийвчлал, давтагдах чадвар нь хязгаарлагдмал байдаг. Дархлаа судлалын аргуудыг ашиглан олж авсан үр дүнд үндэслэн дархлаа дарангуйлагчийн буруу тунгаар өвчтөнүүд нас барсан тохиолдол байдаг. Одоогоор эмнэлзүйн лабораторид дархлаа судлалын шинжилгээг HPLC/MS/MS-ээр сольж байна. Тиймээс Мюнхений их сургуулийн клиникт HPLC/MS/MS систем ашиглан сиролимус болон циклоспорин А-ийн агууламжийг өдөрт 70 орчим дээжийг шинжилдэг. Бүх дээж бэлтгэх, багаж хэрэгслийн хяналтыг нэг ажилтан гүйцэтгэдэг. Мөн лаборатори энэ аргыг ашиглан такролимусыг турших аргад шилжиж байна.

• Цусан дахь такролимус, сиролимус, аскомицин, деметиксиролимус, циклоспорин А, циклоспорин G-ийг нэгэн зэрэг тодорхойлоход HPLC/MS/MS-ийн хэрэглээг тайлбарласан болно. Концентрациар тодорхойлсон хязгаар нь 1.0 - 80.0 нг/мл байна. Циклоспорины хувьд 25 - 2000 нг/мл. Жилийн хугацаанд лаборатори 50 мянга гаруй дээжинд шинжилгээ хийсэн байна.
• Такролимус ба сиролимусыг нэгэн зэрэг хэрэглэх нь эмчилгээний эерэг үр дүнтэй болох нь тогтоогдсон тул эмнэлзүйн шинжилгээнд зориулж цусан дахь HPLC/MS/MS-ийг тусад нь тодорхойлох энгийн бөгөөд үр дүнтэй аргыг боловсруулсан. Нэг сорьцын шинжилгээг бүхэлд нь аналитик муруйд такролимус 2.46% - 7.04%, сиролимусын хувьд 5.22% - 8.30% хооронд нарийвчлалтайгаар 2.5 минут зарцуулдаг. Такролимусын илрүүлэх доод хязгаар нь 0.52 нг/мл, сиролимусын хувьд 0.47 нг/мл байна.

V. HPLC/MS/MS-ээр гомоцистеиныг тодорхойлох

Гомоцистеин нь зүрх судасны өвчин (тромбоэмболизм, зүрхний өвчин, атеросклероз) болон бусад эмнэлзүйн нөхцөл байдалд (сэтгэлийн хямрал, Альцгеймерийн өвчин, ясны сийрэгжилт, жирэмсний хүндрэл гэх мэт) сонирхолтой байдаг. Гомоцистеины шинжилгээний одоогийн аргууд, түүний дотор дархлааны шинжилгээ нь үнэтэй байдаг. Гомоцистеины шинжилгээ хийх хурдан HPLC/MS/MS аргыг олон тооны дээжийн шинжилгээнд эмнэлзүйн байнгын хэрэглээнд зориулан боловсруулсан. Ионжуулалтыг цахилгаан шүрших аргаар хийсэн. Арга нь дахин давтагдах боломжтой, өндөр өвөрмөц, үнэн зөв юм. Аргын давуу тал нь урвалжийн хямд өртөг, дээж бэлтгэхэд хялбар байдаг. Өдөрт 500 ба түүнээс дээш дээжийг шинжлэх боломжтой.

Дүгнэлт

Техникийн үндсэн хязгаарлалтаас шалтгаалан дархлааны шинжилгээний аргуудыг нэлээд сайжруулж байгаа хэдий ч энэ арга нь HPLC-MSMS-тэй харьцуулахуйц зорилтот бодисын нарийвчлал, өвөрмөц чанар, ялангуяа метаболит байгаа тохиолдолд хэзээ ч байхгүй гэдгийг тэмдэглэх нь зүйтэй. Энэ нь ELISA аргын нарийвчлал бага, хуурамч эерэг, худал-сөрөг үр дүнгийн өндөр хувийг эзэлдэг төдийгүй ELISA аргыг ашиглан өөр өөр эмнэлзүйн хэлтэст олж авсан үр дүнг харьцуулах боломжийг олгодоггүй. HPLC-MS/MS-ийн хэрэглээ нь энэхүү сул талыг арилгаж, олон тооны дээжийг метаболит байгаа нөхцөлд, цусны сийвэн болон цусанд агуулагдах дагалдах болон эндоген бодисын хөндлөнгийн оролцоогүйгээр өндөр найдвартай, өндөр нарийвчлалтай, хурдан дүн шинжилгээ хийх боломжийг олгодог. өвчтөнүүд.

Зурагт үзүүлсэн шиг багажийн цогцолборын өртөг өндөр байгаа хэдий ч дэлхийн практик, зөв ​​ажиллагаатай бол энэхүү цогцолбор нь 1-2 жилийн дотор зардлаа нөхдөг. Энэ нь юуны түрүүнд хэдэн арван, хэдэн зуун нэгдлүүдийг нэгэн зэрэг шинжлэх, үнэтэй оношлогооны иж бүрдэл худалдаж авах шаардлагагүйгээс болж нэг шинжилгээний өртөг багатай холбоотой юм. Нэмж дурдахад лаборатори нь шаардлагатай шинжилгээний аргыг бие даан боловсруулах боломжтой бөгөөд иж бүрдэл үйлдвэрлэгчээс хамаарахгүй.

Төхөөрөмжийн зөв тохиргоог сонгох

Байдаг их тооХэдэн зуун мянган Далтон жинтэй уургийн макромолекулуудын бүтцийг тодорхойлохоос эхлээд жижиг молекулуудын ердийн өндөр хүчин чадалтай тоон шинжилгээ хүртэл олон төрлийн асуудлыг шийдвэрлэхэд зориулагдсан масс спектрометрийн янз бүрийн арга, масс спектрометрийн төрлүүд.

Асуудлыг амжилттай шийдвэрлэхийн тулд гол нөхцлүүдийн нэг бол сонголт юм зөв төрөлтоног төхөөрөмж. Бүхэл бүтэн спектрийг шийдэж чадах бүх нийтийн төхөөрөмж байдаггүй аналитик даалгавар. Тиймээс бичил биетнийг тодорхойлох асуудлыг шийдвэрлэхэд зориулагдсан төхөөрөмж нь жижиг молекулуудын тоон шинжилгээ хийх чадваргүй байдаг. Мөн эсрэгээр. Баримт нь нийтлэг нэртэй хэдий ч эдгээр нь өөр өөр физик зарчмаар ажилладаг огт өөр төхөөрөмж юм. Эхний тохиолдолд энэ нь лазер иончлолын эх үүсвэр - MALDI-TOF, хоёр дахь нь - цахилгаан шүршигч ионжуулалт бүхий гурвалсан квадруполь - HPLC-MSMS бүхий нислэгийн цагийн масс спектрометр юм.

Хоёрдахь чухал параметр бол системийн зөв тохиргоог сонгох явдал юм. Масс спектрометрийн тоног төхөөрөмжийн хэд хэдэн томоохон үйлдвэрлэгчид байдаг. Үйлдвэрлэгч бүрийн төхөөрөмж нь өөрийн гэсэн давуу талтай төдийгүй бас байдаг сул талууд, энэ талаар тэд ихэвчлэн чимээгүй байхыг илүүд үздэг. Үйлдвэрлэгч бүр өөрийн гэсэн төхөөрөмж үйлдвэрлэдэг. Нэг аналитик цогцолборын өртөг нь 100,000-аас 1,000,000 доллар ба түүнээс дээш байдаг. Хамгийн оновчтой үйлдвэрлэгч, тоног төхөөрөмжийн зөв тохиргоог сонгох нь санхүүгийн ихээхэн нөөцийг хэмнэхээс гадна даалгаврыг илүү үр дүнтэй шийдвэрлэх болно. Харамсалтай нь эдгээр хүчин зүйлсийг харгалзахгүйгээр лабораторийн тоног төхөөрөмжийг хийсэн олон жишээ бий. Үүний үр дүнд тоног төхөөрөмж сул зогсонги байдалд орж, мөнгө үрэгдэж байна.

Гурав дахь хүчин зүйлийг тодорхойлох амжилттай ажиллаборатори бол ажилтнууд юм. Масс спектрометрийг ажиллуулахад өндөр мэргэшсэн боловсон хүчин шаардлагатай. Харамсалтай нь ОХУ-д нэг ч их сургууль орчин үеийн практик масс спектрометрийн чиглэлээр сургалт явуулдаггүй, ялангуяа эмнэлзүйн хэрэглээтэй холбоотой тул лаборатори тус бүрт боловсон хүчин бэлтгэх ажлыг бие даан шийдвэрлэх шаардлагатай болдог. Мэдээжийн хэрэг, төхөөрөмжийг ажиллуулсны дараа үйлдвэрлэгчээс 2-3 хоногийн танилцуулах сургалт нь аргын үндсийг ойлгох, төхөөрөмжийг ажиллуулах ур чадвар эзэмшихэд хангалтгүй юм.

Дөрөв дэх хүчин зүйл бол шинжилгээний бэлэн арга байхгүй. Лаборатори бүр өөрийн гэсэн тэргүүлэх зорилтуудтай байдаг бөгөөд үүний тулд өөрийн аргыг боловсруулах шаардлагатай байдаг. Энэ төхөөрөмжийг дор хаяж 2-3 жил ажилласан туршлагатай хүн хийж болно. Үйлдвэрлэлийн компаниуд заримдаа нэг юмуу хоёр нийлүүлдэг ерөнхий техникзөвлөмжийн шинж чанартай боловч тэдгээрийг лабораторийн тусгай даалгаварт тохируулж болохгүй.

IN БиофармЭксперт ХХКБид янз бүрийн төрлийн масс спектрометр дээр ажиллаж, аргуудыг боловсруулж, өндөр хүчин чадалтай шинжилгээ хийдэг олон жилийн туршлагатай мэргэжилтнүүдийг ажиллуулдаг. Тиймээс бид дараах үйлчилгээг үзүүлж байна.

1. Үйлчлүүлэгчийн тодорхой ажлуудад тохирох төхөөрөмжийн оновчтой тохиргоог сонгох.
2. Тандем масс спектрометрийн тэргүүлэгч үйлдвэрлэгчдээс тоног төхөөрөмж худалдан авах, нийлүүлэх, ашиглалтад оруулах, тоног төхөөрөмжийг ашиглалтад оруулсан өдрөөс хойш нэг жилийн дотор боловсон хүчнийг шат дарааллаар сургах.
3. Эмнэлзүйн үндсэн асуудлыг шийдвэрлэх бэлэн арга, мэдээллийн сангийн багц.
4. Шинжилгээний аргыг боловсруулах, үйлчлүүлэгчийн тодорхой асуудлыг лабораторид нь ажилтнуудаа оролцуулан шийдвэрлэх.
5. Ажлын бүх үе шатанд арга зүйн дэмжлэг үзүүлэх.