Современные проблемы науки и образования. Успехи современного естествознания Продукция афк в эякуляте отмытыми сперматозоидами

Особые свойства молекулы кислорода и продуктов его превращения

Целенаправленная продукция АФК живыми клетками

Целенаправленная продукция АФК живыми клетками

Все организмы оснащены разнообразными механизмами для целенаправленной генерации АФК. Давно известен фермент NADPH-оксидаза, активно продуцирующий "токсичный" супероксид, за которым порождается вся гамма АФК. Но до самого последнего времени его считали специфической принадлежностью фагоцитирующих клеток иммунной системы, объясняя необходимость продукции АФК критическими обстоятельствами защиты от патогенных микроорганизмов и вирусов. Сейчас стало ясно, что это фермент вездесущ. Он и подобные ему ферменты найдены в клетках всех трех слоев аорты, в фибробластах, синоцитах, хондроцитах, клетках растений, дрожжей , в клетках почки , нейронах и астроцитах коры мозга O 2 - á ­ продуцируют и другие повсеместно распространенные ферменты: NO-синтаза , цитохром Р-450 , гамма-глутамил-транспептидаза , и этот список продолжает расти. Недавно обнаружилось, что все антитела способны продуцировать H 2 O 2 , т.е. они также являются генераторами АФК . По некоторым оценкам, даже в покое 10-15% всего потребляемого животными кислорода подвергается одноэлектронному восстановлению , а в условиях стресса, когда активность супероксид-генерирующих ферментов резко возрастает, интенсивность восстановления кислорода возрастает еще на 20% . Таким образом, АФК должны играть весьма важную роль в нормальной физиологии.

Андрологическая лаборатория

Спермограмма по ВОЗ 2010 1607 p.

Антиспермальные антитела на сперматозоидах (Мар тест непрямой Ig G) 1928 p.

Антиспермальные антитела на сперматозоидах (Мар тест непрямой Ig A) 1928 p.

Антиспермальные антитела на сперматозоидах (Мар тест прямой Ig G) 1499 p.

Антиспермальные антитела на сперматозоидах (Мар тест прямой Ig A) 1499 p.

Посткоитальный тест (тест in vivo) 2142 p.

Тест Курцрока Миллера 2142 p.

Лаборатория клинической андрологии выполняет специальные анализы для мужчин

Все мальчики перед армией в школе проходят медицинский осмотр. Это помогает выявить различные нарушения, в том числе связанные с репродуктивным здоровьем. Редко, когда молодой мужчина в дальнейшем по собственной инициативе обращается к врачу для профилактики. В основном, приходят на обследование, когда уже есть жалобы, либо по инициативе партнерши, либо в законном браке, когда несколько лет не получается зачать ребенка.

Во всех этих случаях, как для профилактики, так и при наличии различных проблем, наша задача – объективно оценить ситуацию, правильно выбрать перечень необходимых анализов, провести исследования и отправить результаты на электронную почту пациента. В дальнейшем пациент при необходимости может обсудить данные этих анализов с врачами урологом-андрологом, или гинекологом-репродуктологом, которые работают в нашей поликлинике.

Основное направление работы лаборатории клинической андрологии – это мужское бесплодие и сочетанные формы мужского и женского бесплодия, а также инфекционно-воспалительные процессы мочеполовой системы мужчины.

Сотрудники лаборатории - врачи, медицинские технологи, лаборанты, - работают вместе уже 6 лет, являются ведущими специалистами по сперматологии в нашей стране. У многих опыт работы в Научном центре акушерства и гинекологии им. В.И.Кулакова, клинике урологии им. Р.М.Фронштейна Первого МГМУ им. И.М. Сеченова, клиники андрологии Российского университета дружбы народов. Лабораторные исследования, выполненные нашими сотрудниками, лежат в основе многих научных работ по андрологии, диссертаций и публикаций, в т.ч. в ведущих англоязычных журналах.

Квалификация, необходимое оснащение и многолетний опыт работы позволяет выполнять различные исследования спермы на экспертном уровне.

Анализы выполняются точно по всем требованиям ВОЗ-2010 года.

Внедрены в клиническую практику самые современные методы оценки функции сперматозоидов: оксидативного стресса, акросомной реакции, фрагментации ДНК, нарушений упаковки хроматина и др.

Все анализы выполняются здесь же в лаборатории, никуда не отвозятся, сразу, как только материал разжижается.

Имеются прекрасные условия для сдачи спермы: отдельная звукоизолированная комната с туалетом и раковиной, большой телевизор. Помещение для сдачи спермы находится непосредственно рядом с лабораторией.

Исследование эякулята (спермы) – основные требования

Исследование спермы - концентрации, подвижности и морфологии сперматозоидов, содержание лейкоцитов, антиспермальных антител, повреждений ДНК, многих других функциональных показателей, - основной метод оценки мужской фертильности.

Несмотря на внедрение компьютерных технологий, исследование спермы, выполненное опытным врачом-лаборантом, по-прежнему самый точный, надежный и воспроизводимый способ диагностики.

Проводить исследование спермы следует в специализированных лабораториях, а не лабораториях общего профиля (тем более не в сетевых лабораториях), поскольку описание большинства параметров спермограммы – подвижность, морфология, МАР-тест и др., - субъективная и в решающей степени зависит от опыта и квалификации врача-лаборанта. В идеале анализ спермы в динамике должен проводить один специалист, поскольку даже при строгом внутреннем контроле качества в лаборатории, расхождения в результатах при выполнении анализа разными врачами могут иметь место.

Сперма – материал непростой. Повышенная вязкость, неполноценная сдача, наличие лейкоцитов, незрелых клеток сперматогенеза, бактерий, различные категории подвижности может правильно определить только врач с большим опытом работы. За последнее время несколько раз менялись нормы ВОЗ по исследованию спермы, и в разных лабораториях стоят разные референсные значения. Так же надо учитывать сезонные колебания показателей спермограммы, состояние пациента на данный момент, его психологические особенности.

Сперму для анализа следует сдавать при половом воздержании от 2 до 7 суток, желательно ближе к привычному ритму сексуальной активности. Исключить алкоголь, не болеть, не париться, не принимать горячую ванну, быть здоровым.

При отклонении показателей спермограммы при первичном обследовании от нормальных, анализ следует повторить через 2-6 нед для подтверждения диагноза. Поскольку сперматогенез – процесс образования зрелого сперматогенеза, - занимает почти 3 мес, любое негативное воздействие (лихорадка, стресс, отравление и др.) может оказывать влияние на качество спермы в течение этого времени.

Необходимо понимать, что даже при большом количестве сперматозоидов, хорошей подвижности, они могут не выполнить свою главную функцию – оплодотворение яйцеклетки, потому что, есть «поломка» на другом уровне. По последним данным, до 30% случаев мужское бесплодие имеет место при «нормозооспермии» - формально нормальной спермограмме. Установление мужского фактора бесплодия требует в этом случае использование специальных функциональных тестов.

Базовыми исследованиями для постановки диагноза «фертилен» или «бесплоден» (может иметь детей или нет), в настоящее время являются:

Спермограмма – определение объема, вязкости, рН спермы, концентрации, подвижности и морфологии сперматозоидов, их агглютинации, количества лейкоцитов и ряда других параметров.

МАR–тест - тест на наличие антиспермальных антител (АСАТ), приводящих к иммунному бесплодию. Различают АСАТ класса IgG и класса IgA, имеющие свои особенности.

Активные формы кислорода (АФК или ROS) в нативном эякуляте (сперме) и на отмытых сперматозоидов. Увеличение продукции активных форм кислорода в нативном эякуляте является чувствительным маркером инфекционно-воспалительного процесса (более чувствительным, чем количество лейкоцитов). Продукция АФК отмытыми сперматозоидами – признак оксидативного стресса половых клеток, при котором страдают даже хромосомы. Оксидативный стресс сперматозоидов – причина не только мужского бесплодия, но невынашивания беременности и врожденных аномалий у детей.

Эти три анализа помогут в постановке правильного диагноза, наметят пути дальнейшего лечения, либо определят необходимость дополнительного исследования при обнаруженных нарушениях.

Необходимо отметить, что каждый день приходят молодые мужчины на сдачу спермограммы и даже не подозревают о наличии гнойного процесса, когда в семенной плазме имеется большое количество лейкоцитов. Это может привести к дальнейшей закупорке семявыносящих путей и в итоге сперматозоиды не выходят наружу или еще хуже, нарушается их процесс формирования. В результате, диагностика фертильности мужчины и инфекционного процесса у нас в лаборатории неразделимы. Только в окрашенных мазках можно увидеть и отличить лейкоциты и незрелые клетки сперматогенеза на разных стадиях развития. И если обнаружен гнойный процесс, то сразу сперму можно исследовать на инфекции передаваемые половым путем и сделать бактериальный посев на аэробы и анаэробы. Так же надо понимать, что воспаление можно обнаружить в сперме, а секрет простаты будет в норме, и наоборот, в секрете простаты может быть воспаление, а в сперме норма. Инфекции передаваемые половым путем исследуют из соскоба, взятого из уретры, для этого пациент должен не мочиться более трех часов. К нам на анализы обращаются мужчины разного возраста для адекватной постановки диагноза «простатит».

Учитывая образ жизни современного молодого мужчины - раннюю половую жизнь, большое количество половых партнерш, секс без барьерной контрацепции, малоподвижный образ жизни, стрессы, - мы рекомендуем профилактически обследоваться не только на инфекции, но и сдавать спермограмму, для контроля рождения здорового потомства.

Семенная жидкость мужчин, больше известная как сперма, в медицине носит название эякулят. Это природная жидкость, выделяемая семенниками, имеющая характерную слизистую структуру, вязкая и непрозрачная.

Выделение эякулята происходит вследствие сексуального возбуждения при половой близости или мастурбации. Эякулят отличается специфическим запахом, похожим на аромат каштана, светлый, почти белый цвет.

Вкус жидкости зависит от продуктов, употребляемых мужчиной, и общего состояния его здоровья. У здоровых представителей мужского пола она имеет слегка соленый вкус с горьковатым оттенком. Как и любая жидкость человеческого тела, эякулят может быть исследован в лабораторных условиях для оценки состояния здоровья пациента.

Анализ эякулята проводится двумя способами: бактериологический посев и спермограмма.

Основные характеристики спермы

При половом акте или мастурбации выделяется небольшое количество семенной жидкости, объем которой зависит от нескольких факторов. Согласно медицинским нормам, он должен находиться в пределах от двух до десяти миллилитров.

Однако у взрослых мужчин количество спермы может быть меньше, снижается ее объем и с каждым половым актом, следующим с непродолжительными временными перерывами. Поэтому врачи чаще ориентируются на границы нормы от двух до пяти миллилитров.

Очень часто представители сильного пола принимают снижение количества выделяемой спермы за тревожный признак, свидетельствующий об ухудшении мужской силы и здоровья. В молодом возрасте мужчины полагают, что чем больше спермы выделяется при семяизвержении, тем больший эффект он производит на сексуальную партнершу.

На самом деле, количество выделяемого эякулята и его качество – две совершенно разные вещи. Не всегда большой объем спермы является показателем ее высокой фертильности. А ведь главное в эякуляте – это количество здоровых и активных сперматозоидов, способных достичь яйцеклетки и оплодотворить ее.

Такая оплодотворяющая способность спермы рассчитывается в лабораторных условиях. Согласно исследованиям, в 1 миллилитре спермы должно находиться от 20 до 25 миллионов здоровых сперматозоидов.

Сам эякулят состоит из семенной плазмы и форменных элементов. К последним относятся не только сперматозоиды, но и гоноциты. Семенная плазма – это основа спермы, отвечающая за ее правильную структуру. Выделяется она в том случаем, если все внутренние мужские органы работают правильно и слаженно. Оценить, насколько семенная жидкость здорова, можно, лишь проведя лабораторные анализы.

Посев эякулята и спермограмма назначаются пациентам в следующих случаях.

1. Бесплодие. Этот диагноз ставится семейным парам, которые в течение года активной половой жизни не смогли самостоятельно зачать ребенка.
2. В качестве обследования перед проведением процедуры экстракорпорального оплодотворения.
3. При подозрении на возможную утрату свойств спермы вследствие перенесенных заболеваний или травм половых органов (инфекционные заболевания, гормональный дисбаланс, варикоцеле и т. д.).
4. В качестве профилактического обследования по желанию пациента.
5. Исследование эякулята входит в состав обязательных диагностик при планировании зачатия малыша семейной парой.

Однако основная задача данного исследования – это определение причины, мешающей мужчине стать отцом, то есть бесплодия. Помогает исследование эякулята выяснить и причины снижения объема выделяемой жидкости, уменьшения количества активных сперматозоидов.

Определят данные анализы возможные воспаления и инфекции, поразившие пациента, что поможет начать не только лечение бесплодия, но и других недугов, а также увеличить количество активных спермиев.

Бакпосев семенной жидкости – одна из наиболее часто выполняемых диагностик, назначаемых для исследования мужского здоровья. Диагноз «бесплодие» все чаще ставится вполне здоровым молодым людям, которые на другие аспекты здоровья не жалуются. Что же приводит к развитию данного недуга?

В первую очередь, это вина самого пациента. Нездоровый образ жизни, вредные привычки, неправильное питание, - все это приводит к гормональному дисбалансу организма, в результате которого снижается количество здоровых сперматозоидов и их активность.

Неразборчивость в половых связях, пренебрежение правилами контрацепции и, как следствие, заболевания половой системы, также влияют на возможность мужчины зачать ребенка.

К этим факторам можно добавить плохую экологическую обстановку, постоянные стрессы и высокое психоэмоциональное напряжение, отсутствие минимальных физических нагрузок, вредные рабочие условия.

Благодаря анализам, врач сможет установить точную причину того, почему не происходит зачатие природным путем, а также назначит лечение, которое устранит данные факторы, повысит качество спермы и восстановит природные функции мужского здоровья. Обычно такое лечение включает ряд мероприятий: прием медикаментов, физиотерапевтические процедуры, изменение образа жизни.

Задача бактериологического посева – определить причины, по которым не происходит зачатие, выявить возможные воспаления, инфекционные болезни и другие дисфункции репродуктивных систем пациента.

Бактериологический посев эякулята и спермограмма

При проведении данного исследования можно выявить вредные микроорганизмы, присутствующие в эякуляте, а также выяснить чувствительность патогенной микрофлоры к определенным видам антибиотических препаратов.

Бактерии и инфекции, присутствующие в семенной жидкости, могут стать причинами изменения структуры эякулята, то есть изменения его вязкости.

Такое явление носит название вискозипатия. Причины ее появления: простатит, варикоцеле, орхит, воспалительные процессы в мочеполовых органах мужчины. Нередки случаи, когда врач не может установить точную причину данных изменений, тогда диагноз звучит как «идиопатическая вискозипатия».

Для уточнения диагноза совместно с бакпосевом проводится и спермограмма, которая подтверждает или опровергает «синдром вязкой спермы». При данном явлении, в организме возникают нарушения работы внутренних половых органов, в результате чего процессы, ответственные за разжижение семенной жидкости, протекают неправильно.

Если эякулят слишком вязкий, плотный, то спермии не могут двигаться в нем свободно, скорость их движения снижается, они становятся неспособными достичь маточных труб и более восприимчивыми к воздействию окружающих факторов, среды влагалища и матки.

Заметить такие нарушения без клинических исследований невозможно, так как объем спермы может оставаться прежним, а вот оплодотворительная способность– очень низкой. В норме вязкость эякулята не должна быть выше двух сантиметров. Превышение становится основанием для постановки диагноза «вискозипатия».

При проведении спермограммы учитываются такие данные семенной жидкости и параметры, как и при других обследованиях, а также некоторые дополнительные характеристики: качество спермиев, наличие или отсутствие эритроцитов (в норме их быть не должно), наличие или отсутствие слизистых форм жидкости, а также биохимические параметры.

Когда назначается бактериологический посев

Бакпосев спермы проводится параллельно с изучением характеристик простатического секрета. Назначаются эти процедуры всем пациентам, у которых врач подозревает наличие воспалительного процесса.

Обследование необходимо для того, чтобы выявить инфекционные заболевания и назначить лечение, способное остановить данные процессы и не допустить их переход в острые или хронические стадии.

В ходе исследования выявляются патогенные микроорганизмы, способные спровоцировать недуги в сфере урологии или вызвать венерические заболевания. Это одно из высокочувствительных исследований, необходимое не только для выбора тактики медикаментозной терапии, но и для контроля проводимого лечения.

Нативный эякулят и активные формы кислорода

Один из новейших методов исследования семенной жидкости – изучение нативных (чистых, необработанных) сперматозоидов. Такая методика позволяет изучить эякулят на субклеточном уровне, в результате чего определяются различные аномальные явления, присутствующие в клетках сперматозоидов.

Для изучения берутся «живые» спермии, излучающиеся под микроскопом, который позволяет их увеличить в 15 тысяч раз.

Чтобы провести исследование правильно, семенную жидкость лучше всего сдавать непосредственно в самой клинике, где будут проводиться исследования. С момента сбора до момента начала лабораторной диагностики должно пройти не более одного часа. Еще одно требование перед сдачей данного анализа – полный половой покой за несколько дней до посещения лаборатории.

Как и при других исследованиях, данный анализ изучает как самих сперматозоидов, так и семенной секрет. Эти параметры должны соответствовать здоровым нормам. Так, щелочной баланс должен быть в пределах от 7,2 до 7,8 рН, объем жидкости – не менее двух мл. Количество сперматозоидов в 1 мл – не менее 20 млн., причем не менее 50% из них должны иметь поступательное движение.

Общий объем клеток с нормальным морфологическим строением не должен быть менее трети от всего количества.

Неактивные и поврежденные сперматозоиды не должны составлять более половины объема полученной семенной жидкости. В случае, если хотя бы один из данных параметров нарушен, можно говорить о мужском бесплодии.

Бывают ситуации, когда в нативном эякуляте наблюдается избыточная продукция активных форм кислорода (АФК). АФК являются основными причинами окислительных процессов в семенной жидкости. Причинами такого явления могут быть болезни половой системы, аутоиммунные расстройства организма, воздействия окружающей среды.

Также продукция АФК увеличивается с возрастом пациента, при хронических недугах эндокринной системы, при тяжелых физических нагрузках. Все это влияет на объем спермиев в эякуляте, а отсутствие их необходимого количества ведет к бесплодию.

Как подготовиться к сдаче анализа

Чтобы провести обследование правильно и получить максимально точные результаты, следует ответственно подготовиться к сдаче эякулята. Сбор его проводится только в специальные стерильные одноразовые контейнеры, которые выдаются в клинике, проводящей подобные анализы.

Запрещено использовать для сбора любую стеклянную тару из-под пищевых продуктов, презервативы, пластиковые пакеты и т. д.

Очень важно отметить на контейнере не только дату, когда был собран эякулят, но и точное время. От этого будет зависеть точность некоторых показателей, изучаемых в процессе диагностики. Для проведения анализа стоит отдать предпочтение клинике, рекомендованной лечащим врачом.

Как только эякулят собран, его следует немедленно отвезти в лабораторию. Нежелательно хранить собранный биоматериал. Но если такой возможности нет, контейнер не нужно ставить в холодильник.

Оптимальная температура хранения – от 20 до 40 градусов. Отсутствие должных условий хранения может привести к появлению ложных результатов. Также за несколько дней до проведения анализа стоит отказаться от интимных отношений.

Результаты анализов обычно получают в течение суток с момента сдачи биоматериала в лабораторию. Полученный бланк с личными данными, основными параметрами, нормами и изученными показателями выдается на руки пациенту.

Расшифровку полученных данных проводит только лечащий врач, который дал направление на проведение диагностики. Он же устанавливает окончательный диагноз и назначает лечебную терапию. Иногда кроме врача-репродуктолога, может потребоваться консультация и других специалистов: уролога, венеролога, хирурга, эндокринолога.

По результатам проведенных лабораторных исследований врач установит точную причину бесплодия и назначит лечение, призванное увеличить количество активных и здоровых спермиев в семенной жидкости. Но кроме приема медицинских препаратов и различных физиопроцедур, лечение должно включать в себя и другие параметры.

Увеличить качество спермы поможет соблюдение здорового образа жизни. Отказ от спиртных напитков и сигарет помогает улучшить результаты анализов в самое короткое время.

Эякулят станет более качественным, если в жизнь пациента войдут даже минимальные физические нагрузки: утренняя зарядка, прогулки, отказ от лифта и т. д.

Если есть возможность посещать фитнес-центры, стоит отдать предпочтение тренировкам, которые не приведут к чрезмерному перегреву организма. Это может быть плавание, йога, упражнения на растяжку.

Увеличить количество активных сперматозоидов способны и перерывы в работе, если она связана с длительным сидением на одном месте. Регулярные перерывы каждый час, при которых пациент сможет встать и походить по комнате, позволят не только дать отдых глазам, но и улучшить кровообращение в тазу, что напрямую влияет на состояние мужского здоровья.

Если встать возможности нет, можно выполнить несколько упражнений сидя.

Важно правильно и регулярно питаться, отказаться от перекусов, особенно вредной едой. Чтобы эякулят был более качественный, основу рациона должны составлять белковые и растительные продукты, а также рыба и кисломолочные напитки. Питаться нужно регулярно, часто и небольшими порциями.

Стоит избегать излишних стрессов и эмоциональных перенапряжений, которые также напрямую влияют на состояние мужского здоровья.

Увеличить объем сперматозоидов поможет отказ от посещения мест, в которых наблюдается повышение температурного режима: баня, пляж. Нижнее белье, особенно в летний период, должно быть только из натуральных тканей.

Синтетика увеличивает температуру тела в паху, что снижает качество спермы.

Такие простые меры помогут дополнить лечение, назначенное лечащим специалистом, в более короткие сроки улучшить результаты анализов и быстрее зачать долгожданного малыша.

Врач сексопатолог-андролог 1 категории. Глава Херсонского отделения Украинской ассоциации планирования семьи.

-- [ Страница 2 ] --

Рис.1. Наиболее частые патологические состояния у мужчин из бесплодных пар с гиперпродукцией АФК.

В целом, гиперпродукция АФК, по нашим данным, имеется у 38,2% пациентов с различными нарушениями качества спермы. Среди мужчин с гиперпродукцией АФК мы чаще всего выявляли варикоцеле (38,9% случаев) и хронический бактериальный простатит в фазе активного воспаления (25,1% случаев); у 8,9% мужчин – кисты в придатках, у 1,2% - отсутствие одного или обоих семявыносящих протоков.

В 52,2% случаев на фоне гиперпродукции АФК мы обнаруживали аутоиммунные реакции против сперматозоидов, сопровождающиеся выработкой АСАТ (рис.1).

На фоне гиперпродукции АФК нормоспермия выявлена в 19,3% случаев. Таким образом, нами установлено, что оксидативный стресс в 80,7% случаях сопровождался ухудшением качества спермы. Причем чаще всего наблюдалась астенозооспермия – 71,4% случаев, затем тератозооспермия – 36,3%, олигозооспермия - 28,3%, пиоспермия – 21,3%, иммунное бесплодие, когда антителами покрыты более половины подвижных сперматозоидов, – 10,6%; в 5% случаев – азооспермия. Следует отметить, что обычно имело место сочетание нескольких диагнозов. Нарушение акросомальной реакции на фоне оксидативного стресса отмечено более чем в половине всех случаев. Учитывая высокую частоту встречаемости отдельных патологических состояний у мужчин из бесплодных пар, актуальной задачей явилась необходимость выяснить степень риска развития оксидативного стресса на фоне различных этиопатогенетических факторов (рис.2).

Нами установлено, что инфекционно-воспалительные заболевания мужских репродуктивных органов, в частности, хронический бактериальный простатит, приводят к оксидативному стрессу сперматозоидов в 64,1% случаев, относительный риск - 2,9. На фоне иммунного бесплодия абсолютный риск оксидативного стресса составляет 40,2-71,0%, относительный - 1,5-2,9 (в зависимости от количества АСАТ). При варикоцеле абсолютный риск оксидативного стресса сперматозоидов составил 29,3-68,1%, относительный – 1,6-2,6 соответственно.

Таким образом, наиболее значимыми причинами развития оксидативного стресса явились хронический бактериальный простатит в фазе активного воспаления, аутоиммунные реакции против сперматозоидов и варикоцеле. Эти патологические состояния наиболее часто диагностировались при мужском бесплодии, и на их фоне отмечался высокий риск развития оксидативного стресса.

Мы изучили особенности оксидативного стресса в группах с различными причинами снижения фертильности. Нами установлено, что при варикоцеле (n=294) продукция АФК составила 0,48+0,40 мВ/с при индивидуальном разбросе значений от 0,01 до 66,15 мВ/с, что в 1,9 раза выше, чем у фертильных пациентов при отсутствии АСАТ и в 8 раз - при наличии аутоиммунных реакций.

Рис.2. Абсолютный риск оксидативного стресса сперматозоидов при различных этиопатогенетических факторах мужского бесплодия . Примечание: *** - различия по сравнению с группой фертильных мужчин достоверны по критерию ХИ-квадрат с p<0,001

В то же время корреляционный анализ не обнаружил взаимосвязи между выраженностью варикоцеле, с одной стороны, и уровнем АФК, в сперме - с другой (R=-0,004; gamma=-0,004; t=-0,003; р>0,05).

Нами проведен анализ особенности продукции АФК в эякуляте мужчин при различных формах варикоцеле. Получили, что гиперпродукция активных радикалов при субклинической форме расширения вен семенного канатика отмечалась в 31,2% случаях, при первой – 33,9%, при второй – 25,5%, 42,9% - при третьей. Таким образом, статистически значимых различий в частоте случаев гиперпродукции активных форм кислорода не выявлено (p>0,05).

Исходя из полученных нами данных, проведение УЗИ органов мошонки является обязательным при обследовании мужчин из бесплодных пар с целью вывления субклинических форм варикоцеле. Установленный диагноз варикоцеле является абсолютным показанием для определения уровня АФК.

На фоне гиперпродукции АФК при варикоцеле показано, по нашему мнению, оперативное лечение вне зависимости от степени варикоцеле.

При одинаковой степени расширения вен семенного канатика продукция АФК возрастала с увеличением продолжительности бесплодия (p<0,04-0,01); в среднем по группам у пациентов с варикоцеле степенью +1 при продолжительности бесплодия от 12 до 36 мес. она составляла 0,39+0,23 мВ/с, при бесплодии больше 36 мес – 0,64+0,45 мВ/с (p<0,05). Исходя из этого, прогноз оперативного лечения в раннем возрасте в плане восстановления фертильности более благоприятный, а выжидательная тактика ведения пациентов с варикоцеле не является обоснованной, учитывая высокий риск оксидативного стресса.

На фоне хронического простатита (n=130) нами установлена прямая зависимость продукции активных радикалов кислорода от количества лейкоцитов в секрете простаты (R=0,24; р=0,04). При повышении числа лейкоцитов в секрете простаты пиоспермия наблюдалась в 36,1% случаев. Зависимость продукции АФК от концентрации в сперме лейкоцитов (R=0,29; p<0,00001) сильнее, чем от содержания лейкоцитов в секрете простаты.

Пациенты с диагнозом «пиоспермия» отличались высоким содержанием АФК в сперме: в среднем по группе продукция составляла 9,81+/-25,56 мВ/с (при выбраковке значений +3S - 1,15+1,34 мВ/с) с индивидуальным разбросом от 0,07 до 153,50 мВ/с; медиана – 0,925 мВ/с, диапазон невыпадающих значений – от 0,07 до 9,52 мВ/с, что существенно больше (3,9 раз), чем у фертильных мужчин (p<0,001).

Значимая корреляция имеется между концентрацией в сперме лейкоцитов и выраженностью бактериоспермии (R=0,23; p=0,033), выраженностью бактериоспермии и продукцией АФК (r=0,35; p<0,01).

На основании полученных данных нами установлена положительная взаимосвязь между продукцией АФК и агглютинацией сперматозоидов у мужчин из бесплодных пар с патозооспермией. Причем при исключении образцов с пиоспермией коэффициент корреляции заметно снижался: R=0,13 (p>0,05), Gamma=0,30 (p=0,05).

Исключение из анализа образцов с концентрацией сперматозоидов менее 10 млн/мл и выпадающих значений (+2S) позволило более точно определять продукцию АФК и активность аутоиммунных реакций. При этих условиях у мужчин с хроническим простатитом, сопровождающимся пиоспермией, продукция АФК в 8,8 раз больше, чем у фертильных, и наблюдается более выраженная (R=0,44), чем для всей выборки, взаимосвязь между содержанием в сперме АФК и лейкоцитов.

Роль воспалительного процесса в повышении продукции АФК в сперме подтверждают результаты антибиотикотерапии хронического простатита (табл. 1). Показано, что уже через 2 недели лечения на фоне снижения количества лейкоцитов в секрете простаты на 39,1% (p<0,01) и на 35,2% в сперме (p>0,05) происходит более чем двукратное снижение продукции АФК (-58,1%; p<0,05). Одновременно происходит улучшение жизнеспособности (p<0,05) и подвижности (p<0,05), нормализация акросомальной реакции сперматозоидов в виде уменьшения доли гамет, преждевременно утративших целостность акросомальной мембраны (p<0,05), а у пациентов с АСАТ – снижение процента MAR-позитивных сперматозоидов (p<0,01).

Таким образом, анализ данных обследования мужчин из бесплодных пар с простатитом показал, что повышенное количество лейкоцитов в сперме на фоне простатита служит основным источником гиперпродукции активных форм кислорода, приводит к оксидативному стрессу и изменению функциональных свойств сперматозоидов.

У половины (51,5%) пациентов из бесплодных пар с пиоспермией обнаружены АСАТ, но только у 9,2% они покрывали более 50% подвижных сперматозоидов.

Корреляция между концентрацией лейкоцитов в сперме и процентом АСАТ-позитивных подвижных сперматозоидов отсутствует (R=0,0; p>0,05).

Нами установлено, что продукция свободных радикалов больше зависит от количества антител на сперматозоидах (R=0,81), чем от процента подвижных МАР-позитивных гамет (R=0,44), определяемого с помощью метода ПЦМ, который мы рекомендуем как более точно характеризующий активность аутоиммунных процессов в эякуляте.

Мы проанализировали особенности продукции АФК при различных формах патоспермии. Корреляционный анализ показателей спермограммы пациентов с тератозооспермией не обнаружил зависимости между процентом патологических форм и продукцией АФК. Однако имеется взаимосвязь между процентом сперматозоидов с измененной шейкой и продукцией АФК и отсутствием АСАТ: r=0,2; p<0,01. Также в этой выборке обнаружена положительная корреляция между продукцией АФК и процентом сперматозоидов, спонтанно претерпевших акросомальную реакцию: r=0,24; p<0,05 для группы пациентов с нормальной концентрацией сперматозоидов и лейкоцитов.

Повышение уровня АФК при тератозооспермии может объясняться выбросом активных радикалов с повреждением мембран сперматозоидов, задержке цитоплазмы, и, наоборот, что вероятней всего, является следствием продукции морфологически дефектными гаметами. При этом нарушается нормальное течение акросомальной реакции и происходит апоптоз гамет с повреждениями целостности их ДНК (Aitken et al., 1989; Saleh et al., 2003; Jedrzejczak et al., 2005; Deepinder F., 2008).

Морфологически измененные сперматозоиды с дефектным ДНК обладают низкой способностью оплодотворять яйцеклетку, а в случае наступления беременности высок риск генетических патологий плода.

Таблица 1

Изменения продукции активных факторов кислорода, показателей спермограммы, акросомальной реакции, процента АСАТ-позитивных сперматозоидов и секрета простаты при антибиотикотерапии хронического простатита у мужчин из бесплодных пар (М + SE)

Показатели	Мужчины с простатитом (n=48)
	До лечения	После 2 нед леч е ния
Активные формы кислорода, мВ/с	22,1+6,91	9,28+4,63**
Лейкоциты спермы, х106/мл	2,07+0,52	1,34+0,58
Подвижные сперматозоиды категории А, %	14,1+1,53	18,3+1,7*
Живые сперматозоиды, %	73,0+2,7	77,6+2,7*
Лейкоциты секрета простаты, единиц в поле зрения	27,6+4,6	16,8+3,8**
MAR IgG-позитивные сперматозоиды, %	31,8+6,93	26,1+6,51**
Акросомальная реакция преждевременная, %	23,3+2,57	18,1+2,21*
Акросомальная реакция индуцированная, %	32,9+3,14	31,7+2,83
Индуцируемость акросомальной реакции, %	8,8+2,6	13,6+2,3

1 Системная красная волчанка (СКВ) является классическим аутоиммунным заболеванием, в патогенезе которого ведущую роль играют гиперпродукция цитотоксических аутоантител к ДНК, формирование иммунных комплексов с их последующей фиксацией под базальной мембраной эпидермиса и в стенках мелких сосудов, а также процессы апоптоза. В развитии органных поражений при этом заболевании особое значение имеет увеличение продукции фагоцитами активных форм кислорода (АФК), обладающих высоким гистодеструктивным действием. В доступной литературе мы не нашли работ относительно особенностей продукции активных форм кислорода (АФК) ключевыми клетками острого и хронического воспалительного процесса - циркулирующими нейтрофилами и моноцитами при суставном синдроме у больных СКВ.

Нами исследована продукция АФК нейтрофилами (Нф) и моноцитами(Мн) с помощью тестов люминолзависимой и люцигенинзависимой (спонтанной и индуцированной убитым стафилококком) хемилюминесценции (ХЛ), отражающих соответственно продукцию высокотоксичных активных форм кислорода (АФК) в системе миелопероксидазы и супероксиданиона у 66 больных СКВ, а также у 22 здоровых доноров. Средний возраст больных СКВ составлял 41,4±10,9 года, длительность процесса соответственно 11±4 года. Минимальная степень активности воспалительного процесса (А1) диагностирована у 41 больного (62,1%), умеренная (АII) - у 25 (37,9%). Острое течение заболевания встречалось у единичных больных (данные их обследования не включены в настоящую работу), подострое течение - у 38 (57,6%), хроническое - у 28 (42,4%). Суставной синдром при СКВ встречался у 49 больных (74,2%).

У больных СКВ, как при наличии, так и при отсутствии поражения суставов, продукция АФК, как Нф, так и Мн, по данным тестов спонтанной люцигенин- и люминолзависимой ХЛ была увеличена по сравнению с показателями группы контроля, характеризуясь выработкой широкого спектра АФК, в том числе высокотоксичных, с мощным гистодеструктивным действием. Индуцированные тесты ХЛ характеризовались вариабельностью, а коэффициенты активации фагоцитов при обеих формах красной волчанки, как правило, были уменьшены, указывая на снижение резервных функций циркулирующих фагоцитов.

При сравнении исследуемых показателей у больных СКВ в зависимости от наличия или отсутствия у них суставного синдрома констатировано снижение индуцированной люцигенинзависимой ХЛ Нф и спонтанной люминолзависимой ХЛ Нф у пациентов с поражениями суставов по сравнению с аналогичными данными в группе больных СКВ с отсутствием суставных поражений.

Проведенные исследования свидетельствуют о повышенной продукции АФК циркулирующими фагоцитами при СКВ, независимо от того, имеются или отсутствуют поражения суставов. Вместе с тем, развитие поражений суставов у больных СКВ сопровождается снижением некоторых показателей окислительного стресса нейтрофилов, что демонстрирует многоликость проявлений окислительного стресса фагоцитов в зависимости от клинических проявлений, в частности, от развития суставных поражений.

Работа представлена на II научную конференцию студентов, молодых ученых и специалистов с международным участием «Современные проблемы науки и образования», 19-26 февраля 2005г. Хургада (Египет)

Библиографическая ссылка

Романова Н.В. ПРОДУКЦИЯ АКТИВНЫХ ФОРМ КИСЛОРОДА ЦИРКУЛИРУЮЩИМИ ФАГОЦИТАМИ И СУСТАВНОЙ СИНДРОМ ПРИ СИСТЕМНОЙ КРАСНОЙ ВОЛЧАНКЕ // Успехи современного естествознания. – 2005. – № 3. – С. 116-116;
URL: http://natural-sciences.ru/ru/article/view?id=8239 (дата обращения: 30.01.2020). Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»